Влияние водного экстракта оливы европейской (Olea Europaea) на функционирование ферментов глиоксилатного цикла у крыс в условиях экспериментального диабета

• Автор: Аль Дайни Саба Хади Бенайед
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 158 с. : ил.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ТЕРМИНОВ

АГ аконитатгидратаза

АМФ - аденозинмонофосфат

АТФ - аденозинтрифосфат

ВЭО - водный экстракт оливы (Olea Еигораеа)

дтт - 1,4-дитио-ОЬ-трейтол

DEAE - диэтиламиноэтил

Ds-Na - додецилсульфат натрия

ГЦ - глиоксилатный цикл

ИЗСД - инсулинзависимый сахарный диабет

ицл - изоцитратлиаза
MC малатсинтаза
НАД+ - никотинамидадениндинуклеотид (окисленная форма)
НАДН - никотинамидадениндинуклеотид (восстановленная форма)
ПААГ - полиакриламидный гель
пдг - пируватдегидрогеназа
СФ спектрофотометр
ТХУ - трихлоруксусная кислота
цтк - цикл трикарбоновых кислот
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат
Km константа Михаэлиса
Mr молекулярная масса
Rf электрофоретическая подвижность
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Использование водного экстракта оливы для лечения сахарного диабета
1.1.1. Понятие об аллоксановом диабете
1.1.2. Биохимические аспекты протекторного действия
водного экстракта оливы
1.2. Метаболизм жирных кислот у млекопитающих при экстремальных и патологических состояниях
1.2.1 .Утилизация запасных липидов при диабете
1.2.2. Мобилизация плазменных свободных жирных кислот
в тканях млекопитающих при диабете
1.3. Биохимия глюконеогенетических процессов
1.3.1. Изменение глюконеогенетических реакций при экспериментальном диабете
1.3.2. Регуляция гормонами глюконеогенеза
на ферментативном уровне
1.3.3. Биохимические особенности метаболизма в пероксисомах
1.3.4. Микротельна (пероксисомы) и их метаболическая функция
1.3.5. Морфология и индукция пероксисом
1.4. Глиоксилатный цикл как промежуточный этап глюконеогенеза
1.4.1. Биохимические аспекты функционирования глиоксилатного цикла
1.4.2. Внутриклеточное распространение глиоксилатного цикла
1.4.3. Экспрессионная регуляция функционирования глиоксилатного цикла
1.4.4. Глиоксилатный цикл в тканях животных

1.5. Ключевые и маркерные ферменты глиоксилатного цикла
1.5.1. Очистка и изучение свойств изоцитратлиазы
из различных организмов
1.5.2. Характеристики малатсинтазы из различных организмов
Глава 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1. Объекты исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Формирование модели аллоксанового диабета у крыс
2.2.2. Приготовление препаратов поджелудочной железы
и печени
2.2.3. Получение водного экстракта из листьев оливы
2.2.4. Выделение клеточных органелл
2.2.5. Определение активности ферментов
2.2.6. Выделение и очистка ферментов
2.2.7. Экстракция
2.2.8. Фракционирование белков с помощью сульфата аммония
2.2.9. Гель-фильтрация
2.2.10. Ионообменная хроматография на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой
2.2.11. Гель-хроматография на колонке с сефадексом
2.2.12. Гель-фильтрация на Тоуореаг1 Н¥
2.2.13. Исследование кинетических характеристик ферментов
272.14. Аналитический электрофорез
2.2.15. Определение гомогенности ферментов
2.2.16. Специфическое проявление МДГ
2.2.17. Определение молекулярной массы
2.2.18. Определение количества белка
2.2.19. Статистическая обработка экспериментальных данных

фотосинтезирующих тканей гликолат окисляется в глиоксилат гликолатоксидазой и затем переаминируется в глицин с глутаматом или серином. Глицин транспортируется в митохондрию, где окисляется до серина, превращаемого далее в гидроксипируват и в глицерат, идущий в цикл Кальвина. Пероксисомы содержат высокоактивную малатдегидрогеназу, роль которой может быть связана с челночными механизмами транспорта восстановленных эквивалентов (Пинейру и др., 1991; Gietl, 1992). У растений, использующих уреиды в качестве транспортной формы азота, имеются микротельца, осуществляющие уреидный метаболизм. От неспециализированных микротелец они отличаются значительно более высокой активностью уратоксидазы. Однако в отличие от подобных микротелец животных, они обеспечивают протекание лишь незначительной части реакций уреидного метаболизма (Huang, 1982).
В клетках животных, грибов и водорослей содержатся неспециализированные пероксисомы. Для некоторых водорослей, спор некоторых грибов обнаруживаются глиоксисомоподобные микротельца.
Как правило, они содержат только два ключевых фермента глиоксилатного цикла - изоцитратлиазу и малатсинтазу. Только в микротельцах эвглены обнаружены все ферменты глиоксилатного цикла. В глиоксисомоподобных микротельцах грибов обнаруживаются ферменты окисления длинноцепочечных спиртов (при росте на алканах и спиртах), каталаза, уратоксидаза, оксидаза D-аминокислот, ферменты /3-окисления жирных кислот, ИЦЛ, МС. НАДН, генерируемый в этих органоидах, сопряжен с митохондриальной ЭТЦ через глицерофосфатный челнок (Tolbert, 1981). В некоторых случаях при протекании глиоксилатного цикла в водорослях ИЦЛ и МС обнаруживаются в растворимой фракции клетки, а микротельца содержат только каталазу и ограниченную активность оксидаз, т.е. являются, скорее всего, неспециализированными. В животных тканях присутствуют неспециализированные микротельца и уреидные микротельца,