Структурно-функциональные отношения трифенилэтиленов и эстрогенового рецептора в клетках рака молочной железы

• Автор: Максимов, Филипп Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 88 с. : 19 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Глава 1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность

Цель настоящего исследования

Задачи настоящего исследования

Положения выносимые на защиту

Глава 2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

2Л История специфической гормональной терапии

2.2. Эстрогеновые рецепторы и механизм действия эстрогенов

2.2.1. Эстрогеновые Рецепторы (ЭР): структура и свойства

2.2.2. Корегуляторы ЭР и механизм действия ЭР

2.2.3. Негеномный механизм действия эстрогенов
2.3. Антигормопальная терапия рака молочной железы
2.3.1 Нестероидные антиэстрогены: переход к специфической терапии
2.3.2 Селективные Модуляторы Эстрогенового Рецептора (БЕЛМ)
2.3.3 Механизм действия 8ЕКМ
2.3.4 Клиническое применение БЕЛМ
2.4 История изучения структурно-функциональных отношений производных трифенилэгилена, в том числе тамоксифена и его метаболитов и ЭР
2.5. Резистентность к аитигормональным препаратам
2.5.1. Нарушение метаболизма тамоксифена
2.5.2. Врожденная резистсптпосгь
2.5.3. Приобретенная резистентность
2.6. Эстрогеновая терапия рака молочной железы
2.6.1 Механизмы эстроген-индуцированного апоптоза
2.6.2 Перспективы применения эстрогеновой терапии в клинике

Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Синтезированные трнфенилэтилены и другие вещества
3.2. Культуры клеток и методы культуральной работы
3.3. Тесты для определения клеточной пролиферации
3.4. Количественное определение апоптоза в культуре клеток
3.5. ДНК-вектора
3.6. Транзиторные трансфекции н люцнферазные репортерные тесты
3.7. Иммуноблоттинг
3.8. Выделение мРНК из клеток и сиптез кДНК
3.9. ПЦР в реальном времени
3.10. Хроматииовая иммунопреципитация (СЫР)
3.11. Молекулярный докинг
Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ НАСТОЯЩЕГО ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Определние биологической активности в линиях клеток рака молочной железы человека МСЕ-7 и МСЕ-7:5С
4.2. Определение эстроен-индуцированпого апоптоза в эстроген-независимых клонах клеток рака молочной железы человека МСЕ-7:5С и его количественный анализ
4.3. Определение опосрсдованности эффектов исследуемых эстрогенов через ЭР
во всех клеточных линиях МСЕ
4.4: Значение аспартата в 351 позиции ЭР для его активации непланарными трифенилэтиленами
4.5. Определение механизмов регуляции транскрипционной активности ЭРа в клетках рака молочной железы
4.6. Результаты молекулярного докипга
Глава 5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5.1. Определение биологической активности непланарных эстрогенов
5.2,Определение способности непланарных эстрогенов активировать апоптотические маркеры
5.3. Определение конформации ЭР при связывании трифенилэтиленов и механизма активации ЭР иепланарными эстрогенами
5.4. Определение роли конформационного изменения ЭР иепланарными эстрогенами в транскрипциопной активности ЭР и его протеосомальной
деградации
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

индуцированный апоптоз в других эстроген-резистентных клетках линии МСР-7:2А, резистентных так же к антиэстрогенам. Клетки рака молочной железы человека МСБ-7:2А были выведены из клеток линии МСР-7 таким же образом как и ранее упомянутая линия МСР7:5С, но отличие является то, что данные клетки хоть и сохранили экспрессию ЭР и растут в бесстероидной среде, но не способны проявлять каких либо ответов на оработку эстрогенами. Блокирование в БЫ Ь-бутионинсульфоксимином (В Б О), который является эффективным блокатором синтеза глутатиона, делает эти резистентные клетки чувствительными к эстрадиол-индуцированному апоптозу [151]. Уровень вБН в клетках линии МСР-7:2А на 60% выше чем в клетках дикого типа линии МСР-7, и клетки МСБ-7:2А на подвергаются апоптозу при добавлении эстраднола в физиологической концентрации. В тоже время, в присутствии ВБО (100 мкМ) эстрадиол в концентрации 1нМ успешно вызывет апоптоз, который может быть зарегистрирован уже через 48 часов после добавления эстрадиола. Важно отметить, что применяемая в данном опыте концентрация Ь-бутионинсульфоксимина (ВБО) (100 мкМ) находится в пределах доз, используемых в клинической практике [152]. Более того, результаты ранних клинических испытаний ВБО показали, что он может безопасно применяться для лечения некоторых онкологических заболеваний [153]. Дальнейшие исследования в этом направлении позволят оценить эффективность совместного применения ВБО и эстрадиола для лечения резистентных форм рака молочной железы.
2.6.2 Перспективы применения эетрогеновой терапии в клинике
Результаты лабораторных исследований показали, что эстроген в низких концентрациях может вызывать апоптотическую гибель опухолевых клеток, которые находились в течение продолжительного времени в условиях эстрогенового голодания во время антигормональной терапии. Это может быть расценено как увеличенная чувствительность к эстрогенам после развития второй фазы резистентности к