Регуляция каталитической активности алкогольдегидрогеназы фармакологическими препаратами Пирацетам, Зорекс и Унитиол

• Автор: Золотарева, Наталья Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Тверь
• Количество страниц: 131 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ

2. Обзор литературы

2.1 .Физико-химические особенности строения

алкогольд егидрогеназ

2.2. Катализируемые реакции и субстратная специфичность различных классов алкогольдегидрогеназ

2.3. Выделение и очистка алкогольдегидрогеназ из различных источников

2.4. Кинетика ферментативных реакции, катализируемых алкошльдегидрогеназами

2.5. Изучение влияния типов ингибиторования на каталитическую активность биокатализаторов

2.6. Эффекторы алкогольдегидрогеназ различной химической природы

3 .ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Используемые в работе вещества
3.2. Посуда, приборы и оборудование
3.3. Методы исследования
3.3.1. Метод Г.А. Кочетова для выделения и очистки алкогольдегидолгеназ
3.3.2. Определение концентрации белка по методу биуретовой 60 реакции
3.3.3. Метод определения ферментативной кинетической
активности алкогольдегидрогеназы
3.3.4. Метод Лайнуивера - Берка для обработки данных
ферментативной кинетики
3.3.5. Метод векторных диаграммных построений
3.3.6. Программное обеспечение Microlab Origin

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
4.1 Выделение, очистка и определение субстратной специфичности 70 алкогольдегидрогеназы
4.2 Определение молекулярно-кинетических параметров каталитической активности алкогольдегидрогеназы печени лошади в 81 системе контроля (ферментативная система-1)
4.3. Изучение влияния Пирацетама на каталитические параметры алкогольдегидрогеназы печени лошади (ферментативная система-2)..
4.4.Выяснение действия НАД на ферментативные параметры алкогольдегидрогеназы печени лошади (ферментативная система-3)..
4.5. Исследование влияния препарата Зорекс на ферментативные параметров АДГ печени лошади (ферментативной системы-4)
4.6. Выяснение влияния Унитиола на каталитическую активность алкогольдегидрогеназы печени лошади (ферментативная система-5)..
5. Анализ данных ферментативной кинетики с использованием
трехмерной Км'V' - системы координат
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АДГ - алкогольдегидрогеназа
НАД - никотинамидадениндинуклеотид, окисленный НАДИ - никотинамидадениндинуклеотид, восстановленный НАДД - никотинамидадениндинуклеотид, восстановленный, дейтерием
САЧ- сывороточный альбумин человека
ДБУА - диоксим бензоилуксусный альдегид
ДМСО - диметилсульфоксид
АДФ - аденозиндифосфат
АМФ - аденозинмонофосфат
АНС - 1-анилинонафталин-8-сульфокислота
ТНС - 2-толуидинонафталин-6-сульфокислота
НаТ ГР04- однозамещенный гидрофосфат натрия
№2НР04“ двузамещенный гидрофосфата натрия
КООС-СНОН-СНОН-СОСЖаАНзО - сегнетовая соль
меченый

оказывают своё действие на какой-либо один фермент или группу родственных ферментов, вызывая обратимое или необратимое ингибирование [160]. Исследование этих ингибиторов имеет важное значение. Во-первых, ингибиторы могут дать ценную информацию о химической природе активного центра фермента, а также о составе его функциональных групп и природе химических связей, обеспечивающих образование фермент-субстратного комплекса. Известны вещества, включая лекарственные препараты, специфически связывающие ту или иную функциональную группу в молекуле фермента [172].
Во-вторых, ингибиторы нашли широкое применение в энзимологии при исследовании природы множественных форм ферментов и изоферментов, различающихся не столько электрофоретической подвижностью, сколько различной чувствительностью к одному и тому же ингибитору.
При помощи ингибиторов, выключающих отдельные стадии многоступенчатого метаболического процесса, могут быть точно установлены не только последовательность химических реакций, но и природа участвующих в этих превращениях ферментов [3; 42; 66; 77].
Если ингибитор вызывает стойкие изменения пространственной третичной структуры молекулы фермента или модификацию функциональных групп фермента, то такой тип ингибирования называется необратимым. Чаще, однако, имеет место обратимое ингибирование, поддающееся количественному изучению на основе уравнения Михаэлиса-Ментена.