Влияние биологически активных соединений с антиоксидантной и рострегулирующей активностью на клеточные и субклеточные структуры

• Автор: Албантова, Анастасия Александровна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Антиоксиданты. Защитная, регуляторная и сигнальная функция.

Защита от апоптоза

1.2. Синтетические антиоксиданты на основе пространственно затрудненных фенолов: фенозан К и ИХФАН-
1.3. Эритроциты - клеточная модель для изучения действия биологически активных соединений и АО

1.4. Влияние стрессовых факторов и АО на растения

1.5. Мелафен - синтетический антиоксидант и регулятор роста растений нового поколения

1.6. Действие АТФ, фитогормонов и мелафена на растительные организмы

1.7. Влияние биологически активных препаратов на сигнальные системы и регуляторные пути апоптоза клеток
ГЛАВА 2. МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА
2.1 Модель совместного действия недостаточного увлажнения и умеренного охлаждения на субклеточные структуры растений
2.2. Выделение митохондрий
2.3. Приготовление образцов для ACM
2.4. Действие препаратов на эритроциты in vivo
2.5. Выделение эритроцитов
2.6. Приготовление образцов эритроцитов для ACM исследования
2.7. Метод ACM (атомно - силовая микроскопия)
2.8. Анализ ACM имиджей митохондрий
2.9. Количественный анализ ACM имиджей эритроцитов
2.10. Метод иммуноблоттинга
2.10.1. Электрофорез
2.10.2. Перенос белков с ПААГ на нитроцеллюлозную мембрану
2.10.3. Блокирование неспецифичных связываний
2.10.4. Детекция белков
2.11. Опухолевые и низкораковые линии мышей
2.12. Определение перекисного окисления липидов флуоресцентным методом
ГЛАВА 3. Исследование действия рострегулятора мелафена на структурные
характеристики растительных органелл и животных клеток, и на индукцию
белков пути апоптоза в клетках мышей линии АКЭ
3.1. Влияние мелафена на морфологию митохондрий проростков гороха при стрессовых воздействиях
3.2. Сигнальные свойства мелафена
3.3. Исследование морфологических изменений эритроцитов в присутствии и отсутствии глюкозы с помощью метода ACM
3.4. Изменение морфологии эритроцитов мышей при действии препарата мелафен
3.5. Влияние мелафена в концентрации Ю'10 М на трансдукцию апоптоза. Определение содержания белка- регулятора р53 и антиапоптозного белка Вс1-2 в клетках АКЭ
ГЛАВА 4. Исследование действия фенозана К и ИХФАН-10 на структурные
характеристики эритроцитов и на трансдукцию белков пути апоптоза
животных клеток
4.1. Изменение морфологии эритроцитов под действием фенозана К и ИХФАН-10 в системах in vitro и in vivo
4.2. Влияние фенозана К и ИХФАН-10 на содержание антиапоптозного белка Вс1-2 в различных клетках
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АО - антиоксидант
ACM - атомно-силовая микроскопия
БАВ - биологически активное вещество
ГЖ-С - протеинкиназа С
ПМ - плазматические мембраны
ПОЛ - пероксидное окисление липидов
СМД - сверхмалая доза
ТРГ - тиреотропин-рилизинг-гормон, тиролиберин
ФК - фенозан калия, 3-3,5-дитретбутил-4-гидроксифенил пропионат калия
АКЭ - асцитная карцинома Эрлиха
РРР - регулятор роста растений
СЖК - свободные жирные кислоты
АФК, ROS - активные формы кислорода
ДДС - Na - додецилсульфат натрия
МФ - мелафен
НУ - недостаточное увлажнение БСА - бычий сывороточный альбумин

факторов внешней среды, часто используют синтетические регуляторы роста, а также природные фитогормоны. Аналоги природных фитогормонов должны быть безопасны для окружающей среды, животных и для здоровья человека, поэтому так важен поиск нетоксических соединений.
Экспериментально было показано, что таким препаратом является препарат мелафен, который обладает высокой физиологической активностью, сравнимой с природными регуляторами роста (кинетином), и сравним с действием АТФ в низких концентрациях. Авторы сделали вывод, что препарат играет не субстратную роль, а подобно фитогормонам (в том числе кинетину, зеатину) действует в ничтожно малых количествах, необходимых для запуска и регуляции физиологических и генетических программ, аналогичных действию АТФ [88]. Фитогормоны имеют определенные рецепторы в растительной клетке, благодаря которым они могут как активировать, так и замедлять функциональную активность клеток и вызывать как быстрые, так и медленные физиологические реакции. Быстрые физиологические реакции обычно связаны с воздействием фитогормонов на мембраны, а медленные зависят от синтеза белков и нуклеиновых кислот [89].
1.7. Влияние биологически активных препаратов на сигнальные системы и регуляторные пути апоптоза клеток
Механизмы действия новых антиоксидантов и регулятора роста растений еще недостаточно изучены, поэтом представляет интерес определить их влияние на клеточные системы и трансдукцию сигнала в

животных клетках, тем более, что ранее было обнаружено, что мелафен, фенозан К и ИХФАН-10, по-разному влияют на Са2~ регуляцию в клетках животных, вызывая флуктуацию их объема при введении АТФ [31,51].