Исследование процессов модуляции структурно-функциональных свойств лимфоцитов человека в условиях воздействия УФ-света и активных форм кислорода: роль ионов кальция, цАМФ и NO

• Автор: Лидохова, Олеся Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 162 с. : ил.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

1,8-АНС - 1-анилинонафталин-8-сульфонат

АФК - активные формы кислорода

ДАГ - диацилглицерол

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФ3 - инозитол-1,4,5-трифосфат

ПГЕ2 - простагландин Е

ПОЛ - пероксидное окисление липидов

УФ-облучение - ультрафиолетовое облучение

цАМФ - циклический аденозинмонофосфат

ФИФ2 - фосфатидилинозитол-4,5-дифосфат

ФЛА2 - фосфолипаза А
ФЛС - фосфолипаза С
[Са2Д - цитоплазматический кальций
'02 - синглетный кислород
От - супероксидный анион-радикал
Н202 - пероксид водорода
ОН' - гидроксильный радикал
N0 - оксид азота
КБ-АТ - ядерный фактор активированных Т-клеток ИБ-кВ - ядерный фактор кВ

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Структурно-функциональные свойства лимфоцитов
1.2. Современные представления о механизмах передачи внешнего сигнала в клетку
1.2.1. Общая характеристика процессов передачи внешнего сигнала в
клетку
1.2.2. Аденилатциклазный путь передачи информации в клетку
1.2.3. Фосфоинозитидный путь передачи сигнала в клетку
1.2.4. Са2+-транспортирующие системы клетки
1.2.5. Роль N0 в процессах трансдукции сигнала
1.2.6. Участие арахидоновой кислоты и продуктов ее метаболизма
в процессах передачи информации в клетку
1.2.7.Роль активных форм кислорода в процессах трансдукции
внешнего сигнала в клетку
1.3. УФ-индуцированные изменения структурно-функциональных
свойств лимфоцитов
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. Объект и методы исследования
2.1. Объект исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение лимфоцитов из крови доноров
2.2.2. Определение жизнеспособности лимфоцитарных клеток
2.2.3. Разделение лимфоцитов на Т- и В-популяции
2.2.4. Системы генерации активных форм кислорода
2.2.5. УФ-облучение исследуемых образцов
2.2.6. Определение концентрации кальция в цитплазме лимфоцитов
2.2.7. Определение уровня цАМФ в цитозоле иммуноцитов
2.2.8. Определение уровня N03 в лимфоцитах
2.2.9. Исследование изменений структурного состояния лимфоцитарных мембран при помощи метода флуоресцентных зондов
2.2.10. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов
2.2.11. Определение функциональной активности Са2+-АТФазы
лимфоцитов
2.2.12. Исследование апоптоза лимфоцитарных клеток человека с помощью проточной цитофлуориметрии
2.2.13. Статистическая обработка результатов экспериментов
ГЛАВА 3. Исследование изменений уровня некоторых вторичных мессенджеров в лимфоцитарных клетках человека в условиях воздействия УФ-света
3.1. Изменение уровня цАМФ в лимфоцитарных клетках человека после воздействия УФ-света
3.2. Изменение уровня цитозольного кальция в лимфоцитах человека после их УФ-облучения
3.3. Изменение уровня оксида азота в лимфоцитах человека после воздействия УФ-света
3.4. Структурные модификации лимфоцитарных мембран после воздействия УФ-света
3.4.1. Исследование изменений структурного состояния лимфоцитарных мембран после воздействия УФ-света при помощи флуоресцентного зонда 1-анилинонафталин 8-сульфоната
3.4.2. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов человека после УФ-облучения
3.4.3. Исследование изменений функциональной активности Са2^ -АТФазы лимфоцитов человека после воздействия УФ-света

рецепторами плазматических мембран, ассоциированными с G-белками и инициацией соответствующих систем сигнальной трансдукции (D.S. Straus, С.К. Glass, 2001).
Известно, что ПГ являются локальными регуляторами клеточного иммунитета. ПГ группы Е ингибируют пролиферацию в опухолевых клетках, увеличивая при этом синтез цАМФ. Напротив, ПГА ингибировали пролиферацию данных клеток, не изменяя уровень цАМФ (K.V. Honn, L.J. Marnett, 1985). ПГЕ ингибирует продукцию лейкоцитами IL 2, необходимого для пролиферации Т-клеток (О.И. Губич, М.В. Шолух, 2006). Показано, что ПГЕ1 и ПГЕ2 угнетают выработку антител против эритроцитов барана, что коррелировало с накоплением в лимфоцитах цАМФ (K.L. Melmon et al., 1974).
Несмотря на накопленные данные, отсутствуют детальные представления о механизмах действия ПГ на иммунокомпетентные клетки. В связи с этим представлялось необходимым исследовать изменения уровня цитоплазматического кальция, как важнейшего внутриклеточного регулятора, в лимфоцитарных клетках человека после воздействия фосфолипазы А2 и простагландина Е2.
1.2.7. Активные формы кислорода: механизмы образования, свойства, роль в процессах трансдукции внешнего сигнала в клетку
Кроме полного четырехэлектронного восстановления молекулы 02 до воды в дыхательной цепи митохондрий в аэробных клетках всегда происходит и неполное - одно - трехэлектронное восстановление с последовательным образованием различных нестабильных кислородных метаболитов: супероксидного анион-радикала (0:2), пероксида водорода (Н202), гидроксильного радикала (ОН') и др. (В.И. Кулинский, 1999; Ю.А. Владимиров, 2000; К.Т. Турпаев, 2002).