Исследование пространственной динамики генерации тромбина в процессе свертывания крови

• Автор: Дашкевич, Наталья Михайловна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 114 с. : ил.

Содержание
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 СИСТЕМА ГЕМОСТАЗА ЧЕЛОВЕКА
1.2 СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ПЛАЗМЕННОМ ЗВЕНЕ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА
1.2.1 Общие сведения о системе свертывания
1.2.2 Активация системы свертывания
1.2.3 Формирование ферментных комплексов
1.2.3 Петли положительной обратной связи
1.2.4 Формирование фибринового сгустка
1.2.5 Ингибиторы свертывания и отрицательные обратные связи
1.3 ТРОМБИН В СИСТЕМЕ ГЕМОСТАЗА
1.3.1 Структура тромбина
1.3.2 Функции тромбина в системе плазменного свертывания
1.3.4 Активация тромбоцитов тромбином
1.4 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МОДЕЛИ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ
1.4.2 Пространственно-однородные модели процесса свертывания
1.4.3 Пространственно-распределенные модели процесса свертывания
1.4.4 Пространственно-однородные модели исследования динамики факторов свертывания
1.4.5 Пространственно-распределенные модели исследования динамики факторов свертывания
1.5 АВТОВОЛНОВАЯ ГИПОТЕЗА РАСПРОСТРАНЕНИЯ СВЕРТЫВАНИЯ В ПРОСТРАНСТВЕ
1.5.1 Представление об активных средах
1.5.3 Автоволновая гипотеза распространения процесса свертывания
1.6 ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 МАТЕРИАЛЫ

2.3 ПОДГОТОВКА ПЛАЗМЫ КРОВИ
2.3.1 Получение плазмы крови, свободной от тромбоцитов
2.3.2 Получение плазмы крови, обогащенной тромбоцитами
2.3.3 Работа с замороженной плазмой
2.3.4 Стабилизация pH плазмы
2.3.5 Восполнение плазмы факторами свертывания
2.3.6 Дефибринирование плазмы
2.4 ИММОБИЛИЗАЦИЯ ТРОМБОПЛАСТИНА НА ПОЛИСТИРОЛОВУЮ ПОВЕРХНОСТЬ
2.6 ПРИГОТОВЛЕНИЕ ФОСФОЛИПИДНЫХ ВЕЗИКУЛ
2.7 СТАНДАРТНЫЕ ТЕСТЫ: АЧТВ И ИЗМЕРЕНИЕ УРОВНЯ ФАКТОРА VIII
2.8. И ССЛЕДОВАНИЕ СВЯЗЫВАНИЯ АМС С БЕЛКАМИ ПЛАЗМЫ
2.9 ИЗМЕРЕНИЕ КОЭФФИЦИЕНТА ДИФФУЗИИ АМС
2.10 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ СИСТЕМА
2.10.1 Гомогенный тест генерации тромбина
2.10.2 Установка для иследования пространственной динамики генерации тромбина
2.10.2.1 Конструкция кюветы
2.10.2.2 Схема и принцип работы установки
2.10.2.3 Эксперименты в свободной от тромбоцитов плазме
2.10.2.4 Эксперименты в плазме в присутствии тромбоцитов
2.10.2.5 Эксперименты в дефибринированной плазме
2.11. ПРОГРАМНЫЙ КОМПЛЕКС ПОЛУЧЕНИЯ И ОБРАБОТКИ ИЗОБРАЖЕНИЙ
2.11.1 Получение изображений
2.11.2 Обработка экспериментальных кадров
2.11.3 Восстановление распределения активности тромбина
2.11.4 Определение параметров пространственной динамики тромбина
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 РАЗРАБОТКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕТОДИКИ
3.1.1 Измерение коэффициента диффузии АМС

3.1.2 Измерение связывания АМС с белками плазмы
3.1.3 Измерение влияния искажений, вносимых фибриновым сгустком
3.1.4 Сравнение с гомогенным тестом генерации тромбина
3.2 ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ ГЕНЕРАЦИИ ТРОМБИНА В НОРМАЛЬНОЙ ПЛАЗМЕ
3.3 ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАВИСИМОСТИ ДИНАМИКИ ГЕНЕРАЦИИ ТРОМБИНА ОТ СИЛЫ АКТВИРУЮЩЕГО СИГНАЛА И ЛИПИДНОГО СОСТАВА ПЛАЗМЫ
3.3.1 Пространственная динамика генерации тромбина при использовании активаторов с низкой плотностью тканевого фактора
3.3.2 Влияние фосфолипидных везикул на пространственную динамику генерации тромбина
3.3.3 Пространственная динамика генерации тромбина в присутствии тромбоцитов
3.4 ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНКЦИИ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ ОБРАТНЫХ СВЯЗЕЙ В РАСПРОСТРАНЕНИИ АКТИВНОСТИ ТРОМБИНА В ПРОСТРАНСТВЕ
3.4.1 Пространственная динамика генерации тромбина в плазме, дефицитной по фактору XI и при добавлении фактора XI
3.4.2 Пространственная динамика генерации тромбина в плазме, дефицитной по фактору VIII и при добавлении фактора VIII
3.5 ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНКЦИИ ОТРИЦАТЕЛЬНЫХ ОБРАТНЫХ СВЯЗЕЙ В РАСПРОСТРАНЕНИИ АКТИВНОСТИ ТРОМБИНА В ПРОСТРАНСТВЕ
3.5.1 Влияние тромбомодулина на пространственную динамику генерации тромбина
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1 АВТОВОЛНОВЫЕ СВОЙСТВА РАСПРОСТРАНЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТРОМБИНА В ПРОСТРАНСТВЕ
4.2 ВОЗМОЖНЫЙ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ СМЫСЛ АВТОВОЛНОВОГО РАСПРОСТРАНЕНИЯ ТРОМБИНА
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

активатор
О мин
10 мин
20 мин
30 мин
Рис.1.8 Пространственная динамика образования фибринового сгустка. Рисунок воспроизведен из работы [100]. Фотографии растущего фибринового сгустка в различные моменты времени после активации. Активирующая поверхность показана стрелкой
локализован на поверхности поврежденного сосуда. Однако образование фибринового сгустка является интегральным результатом работы каскада. Исследованием реакций свертывания на более глубоком уровне является исследование динамики тромбина, который является ключевым регуляторным ферментом.
1.4.4 Пространственно-однородные модели исследования динамики факторов свертывания
В случае пространственно-однородных систем существует два основных подхода исследования динамики факторов свертывания. Первый основан на непрерывном измерении концентрации активого фактор путем добавления в систему флуорогенного или хромогенного субстрата, специфичного к данному фактору [101]. Тромбин отщепляет от субстрата молекулу, которая или изменяет оптическую плотность среды (хромогенные субстраты) или является флуорофором (флуорогенные субстраты). Наилучшим образом сейчас разработана методика измерения динамики тромбина в процессе образования сгустка [102,103,103,104,104,105] Измерение может проводиться как в плазме, так и в цельной крови [105].