Механизмы действия фенозана калия в сверхмалых дозах на плазматические мембраны IN VITRO

• Автор: Часовская, Татьяна Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 160 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Действие биологически активных веществ в сверхмалых дозах -перспективная область исследований
1.1.1. Основные закономерности действия биологически активных веществ в сверхмалых дозах
1.1.2. Роль рецепторных взаимодействий в механизме действия биологически активных веществ в сверхмалых дозах
1.2. Особенности структуры жидкой воды, наноассоциатных комплексов БАВ и их роль в механизме действия биологически активных веществ в сверхмалых дозах

1.2.1. Структура жидкой воды

1.2.2. Роль воды в эффектах сверхмалых доз биологически активных веществ

1.3. Биологические мембраны как мишень действия сверхнизких концентраций активных веществ
1.3.1. Состав и структура биомембран
1.3.2. Система регуляции пероксидного окисления липидов в биологических мембранах
1.3.3. Влияние различных биологически активных веществ на регуляторные системы, сосредоточенные в биомембранах
1.4. Фенозан калия - вещество, проявляющее активность в сверхнизких
концентрациях
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Методика приготовления растворов фенозана калия
2.2. Выделение плазматических мембран из клеток печени мышей
2.3. Определение концентрации белка в мембранах

2.4. Экстракция липидов из плазматических мембран
2.5. Приготовление липосом из липидов методом озвучивания
2.6. Применение метода спиновых зондов для изучения структурнодинамического состояния глубоколежащих областей липидов плазматических мембран и липосом
2.6.1. Измерение вязкостных характеристик различных областей липидного бислоя мембран при постоянной температуре
2.6.2. Определение положения термоиндуцированных структурных переходов в липидном бислое мембран и расчет эффективной энергии их активации
2.7. Определение размеров липосом методом динамического лазерного светорассеяния
2.8. Определение размеров и формы липосом методом атомно-силовой микроскопии
2.9. Применение метода дифференциальной сканирующей калориметрии для исследования термодинамических характеристик плазматических мембран
2.10. Статистические методы обработки данных
Глава 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ И ОБСУЖДЕНИЕ
РЕЗУЛЬТАТОВ
3.1. Влияние фенозана калия на структурное состояние липидов плазматических мембран клеток печени мышей in vitro
3.1.1. Влияние фенозана калия на состояние глубоколежащих областей (-20-22 А) липидного бислоя плазматических мембран в диапазоне концентраций Ю'5-Ю'20 М при температуре 293 К
3.1.2. Влияние фенозана калия в диапазоне концентраций 10'5-10'2° М на анизотропию вращения зонда Сь в плазматических мембранах клеток печени мышей
3.1.3. Температурные зависимости времени вращательной корреляции tci зонда С,б и термоиндуцированные структурные переходы в глубоколежащих областях плазматических мембран в контроле и под

действием фенозана калия в концентрациях 10' М, 10' М и 10'18 М в диапазоне температур 285-315 К
3.1.4. Влияние фенозана калия на структуру поверхностных областей (~8 А) липидного бислоя плазматических мембран в диапазоне концентраций 10'3-Ю'20 М при температуре 293 К
3.1.5. Температурные зависимости параметра упорядоченности Б зонда С5 и термоиндуцированные структурные переходы в поверхностных областях плазматических мембран в контроле и под действием фенозана калия в концентрациях 10'6 М, 10'7 М, 10'12 М, 10'14 М и 10'15 М в диапазоне температур 285-315 К
3.2. Влияние фенозана калия на термоиндуцированные структурные переходы в плазматических мембранах и их энтальпию, изученные методом дифференциальной сканирующей калориметрии
3.3. Влияние фенозана калия на структурно-динамические характеристики липосом, приготовленных из липидных экстрактов плазматических мембран клеток печени мышей
3.3.1. Изменение микровязкости глубоколежащих областей липидов липосом (~20-22 А) под действием фенозана калия в диапазоне

концентраций 10' -10' М при температуре 293 К
3.3.2. Температурные зависимости микровязкости глубоколежащих слоев липосом в контроле и при действии фенозана калия в концентрациях 10'6 М; 10'12 М и 10'18 М
3.3.3. Изменение жесткости поверхностных областей (~8 А) липосом под действием фенозана калия в диапазоне концентраций Ю'5-Ю'20 М при температуре 293 К
3.3.4. Температурные зависимости параметра упорядоченности приповерхностных областей липосом в контроле и при действии фенозана калия в концентрациях 10'6 М, 10'12 М и 10'14 М

1.3. Биологические мембраны как мишень действия сверхнизких концентраций активных веществ
Мембраны играют ключевую роль, как в структурной организации, так и в функционировании всех клеток. Они являются не только естественным барьером между содержимым клетки и окружающей средой, но и активно учувствуют в регуляции клеточных процессов. В состав мембран входит большое количество разнообразных компонент, образующих комплексы и осуществляющих как перенос молекул, так и передачу информации в клетку посредством конформационных изменений.
1.3.1. Состав и структура биомембран
Основными компонентами любых биомембран являются липиды и белки. На долю углеводов может приходиться до 10% массы мембран, но при этом они всегда входят в состав гликолипидов или гликопротеинов [159]. Соотношение липидов и белков варьирует в зависимости от типа мембран. Так, в плазматических мембранах клеток печени мышей, исследованию которых посвящена данная работа, оно составляет приблизительно 1:2 (липиды:белки) [159]. Фосфолипидный состав ПМ представлен в таблице 1.
Таблица 1. Фосфолипидный состав ПМ в % от общих фосфолипидов [ 160]
Фосфатидилэтаноламин 21,
Фосфатидилхолин 35,
Сфингомиелин 12,
Фосфатидилинозит 8,
Фосфатидилсерин 9,
Лизофосфатидилхолин 12,
Фосфатидная кислота 5,
Кардиолипин