Исследование биофизических аспектов пространственной динамики роста фибринового сгустка in-vitro

• Автор: Карамзин, Сергей Сергеевич
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 123 с. : ил.

Содержание

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Система свертывания крови

1.1.1. Общее представление о системе гемостаза человека

1.1.2. Плазменное звено системы гемостаза

1.1.2.1. Активация системы свертывания

1.1.2.2. Пространственный рост гемостатического сгустка

1.1.2.3. Торможение роста и локализация сгустка

1.1.2.4. Влияние диффузии на свертывание

1.1.2.5. Роль тромбина в регуляции процесса свертывания
1.1.2.6. Влияние потока на плазменное звено системы гемостаза
1.2. Нарушения системы свертывания крови
1.2.1. Гемофилии
1.2.2. Гиперкоагуляционные состояния
1.2.2.1. Гиперкоагуляционные состояния при инфекции и сепсисе
1.2.2.2. Злокачественные заболевания
1.2.3. ДВС синдром
1.3. Методы лабораторной диагностики нарушений плазменного звена системы гемостаза
1.3.1. Физическая основа современных методов диагностики
1.3.2. Скриннинговые коагуляционные тесты
1.3.3. Тесты активации свертывания
1.3.4. Тесты комплексной оценки состояния гемостаза
1.3.4.1. Тромбоэластография
1.3.4.2. Тест генерации тромбина
1.3.5. Сравнение существующих методов диагностики
1.3.6. Метод пространственной динамики свертывания крови
1.4. Постановка задачи
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.2. Доноры крови
2.3. Получение плазмы крови

2.4. Рекапьцификация плазмы
2.5. Метод измерения
2.6. Активатор свертывания
2.7.Измерительная кювета
2.8. Измерительный прибор
2.9. Программное обеспечение
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Прибор для исследования пространственной динамики свертывания
3.1.1. Измерительная кювета
3.1.2. Активатор свертывания
3.1.3. Структурно-функциональная схема прибора для исследования пространственной динамики свертывания
3.1.4. Основные узлы и блоки измерительного прибора
3.1.4.1. Блок термостатирования
3.1.4.2. Блок освещения
3.1.4.3. Блок регистрации
3.1.4.4. Блок управления
3.1.4.5. Внутренняя компоновка прибора
3.2. Обработка результатов и вычисление количественных характеристик фаз
3.2.1. Пространственная динамика роста фибринового сгустка
3.2.2. Двумерная кинетика образования тромбина
3.3. Выходные характеристики прибора и протоколы проведения исследования
3.3.1. Внешний вид и технические характеристики прибора
3.3.2. Протокол измерения пространственной динамики роста фибринового сгустка
3.3.3. Протокол исследования кинетики генерации тромбина
3.3.4. Измерение эндогенного тромбинового потенциала
3.4. Измерение параметров пространственной динамики свертывания у здоровых доноров
3.5. Примеры измерения пространственной динамики свертывания в случае различных патологий
3.5.1. Пространственная динамика свертывания плазмы у больных тяжелой формой гемофилии А
3.5.2. Пространственная динамика свертывания при сепсисе
3.5.3. Пространственная динамика свертывания при онкологических заболеваниях и химиотерапии
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Фазы процесса пространственного роста сгустка
4.2. Применение прибора в клинической практике
4.3. Применение прибора в научно-исследовательской работе
4.4. Перспективы развития
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

В основе большинства современных приборов для лабораторных исследований системы гемостаза лежат различные модификации фотооптических методов детекции (турбидиметрия, нефелометрия, амидолитические методы с использованием хромогенных и флуорогенных субстратов, иммунохимические методы). Благодаря своей относительной простоте, наглядности и возможности исследовать процесс свертывания в целом, а также активность его отдельных составляющих, фотооптические методы детекции являются основой для построения как простых коагулометров, детектирующих время полного свертывания образца плазмы, так и для более сложных экспериментальных систем, позволяющими не только регистрировать в реальном масштабе времени такие параметры формирующегося сгустка как его размеры, плотность и скорость роста, но также исследовать его внутренний состав и структуру.
1.3.2. Скриннинговые коагуляционные тесты
Скрининговые тесты на состояние внутреннего и внешнего каскада активации протромбиназы позволяют выявлять нарушения со стороны факторов-субстратов, кофакторов, ингибиторов каскада свертывания, а также действие некоторых лекарственных препаратов или аутоантител. Основным тестом на состояние внутреннего пути свертывания плазмы является активированное частичное тромбопластиновое временя (АЧТВ), на состояние внешнего пути - протромбиновос время (ПВ).
Для проведения исследования используют бедную тромбоцитами плазму, которую смешивают с активаторами свертывания (каолин или эллагиевая кислота для АЧТВ, тромбопластнн для ПВ). Обычно сразу с активатором в плазму добавляются фосфолипиды, необходимые для эффективного прохождения основных реакций свертывания. К ней также добавляется раствор хлорида кальция в достаточно большом количестве, чтобы в плазме опять появились свободные ионы кальция взамен тех, которые были связаны при взятии образца крови в пробирку с цитратом натрия. Этот этап называется рекальцификацией. Добавление активатора, фосфолипидов и кальция немедленно стимулирует запуск процесса свертывания. Интервал времени между рекальцификацией и появлением фибринового сгустка и является результатом тес га [123].
В тесте ПВ активация производится высокой концентрацией тромбонластина, что ведет к быстрому (10-15 секунд) свертыванию нормальной плазмы. При недостатке факторов VII, X, V, II это время увеличивается. ПВ также удлиняется при назначении многих антикоагулянтов [6]. В тесте ПВ используется очень сильная активация по внешнему пути [124]. Она приводит к тому, что фактор X очень быстро активируется внешней теназой, и внутренний путь свертывания не успевает внести заметного вклада.