Идентификация, локализация и функции 2`,3`-циклонуклеотид-3`-фосфодиэстеразы (CNP) в митохондриях крыс

• Автор: Бабурина, Юлия Леонидовна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 107 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Мх - митохондрия
ПААГ — полиакриламидный гель
ЦНС - центральная нервная система
ПНС - периферическая нервная система
ADP - аденозиндифосфат
AIF — апоптозиндуцирующий фактор
АМР - аденозинмонофосфат
сАМР - циклоаденозинмонофосфат
cNADP - циклоникотинамидадениндинуклеотид
cGMP - циклогуанидинмонофосфат
CNP - 2’,3’-циклонуклеотид-3’-фосфодиэстераза
CsA - циклоспорин А
SDS - додецилсульфат натрия
АТР - аденозинтрифосфат
ANT - адениннуклеотидтранслоказа
CsA - циклоспорин А
CvpD - циклофилин Д
PBR - периферический бензодиазепиновый рецептор Р/ - неорганический фосфат РК - протеинкиназа
РТР (permeability transition роге) -неселективная пора во внутренней
митохондриальной мембране
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
РНК - рибонуклеиновая кислота
ТРР - катион тетрафенилфосфония
TSPO - белок-переносчик
VDAC - потенциалзависимый анионный канал
Д|/м - митохондриальный трансмембранный потенциал
siRNA - пул химически синтезированного РНК
[-V - Функциональные Комплексы внутренней мембраны митохондрий СОХ IV - цитохром оксидаза
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Е ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. 2’,3’-циклонуклеотид-3’-фосфодиэстераза
1.1.1. Молекулярная структура и физико-химические свойства СИР
1.1.2. Субстраты и факторы, влияющие на ферментативную активность СИР
1.1.3. Взаимодействие с белками и нуклеиновыми кислотами
1.1.4. Пост-трансляционная модификация СИР
1.1.5. Локализация СИР в олигодендроцитах
1.1.6. Роль СИР в патогенезе заболеваний нервной системы
1.1.7. Локализация СИР вне нервной системы
1.2. Структура и функции митохондрий
1.3. Неспецифическая кальций-индуцируемая, циклоспорин А-чувствительная пора внутренней мембраны Мх (РТР)
1.4. Регуляция митохондриальных функций
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Химические препараты и биологические объекты, использовавшиеся в экспериментах
2.2. Выделение митохондрий из мозга крыс
2.3. Выделение митохондрий из клеток, а также печени и сердца крыс
2.4. Выделение Мх из олигодендроцитов, а также культур клеток глиомы С
2.5. Определение белка по Лоури
2.6. Фосфорилирование митохондриальных белков
2.7. Измерение величины трансмембранного потенциала и транспорта Са2' в митохондриях
2.8. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.9. Метод очистки 46 кДа фосфобелка

кДа 46—►
21 *■
17--►

Рисунок 7. Спектр митохондриальных белков в контрольных условиях (1) и в условиях открытой поры (2). Azarashvili, 2005, 97, 1
Недавно, было показано, что сАМР-зависимому фософорилированию подвергаются также белки внешней мембраны, считающиеся компонентами/регуляторами неспецифической митохондриальной поры, такие как VDAC (Вега, 1995, 2001) и 18 кДа белок-транслокатор (TSPO) (Liu at all, 2003).
Кроме ПКА, в регуляции модуляторов РТР могут участвовать и тирозиновые протенкиназы. Среди фосфобелков, содержащих фосфотирозиновые остатки, были выявлены VDAC, ANT и цитохром с (Cyt с) (Feng, 2008, Yu, 2008).
Основываясь на наших результатах, демонстрирующих присутствие фосфорилированного 46 кДа белка в митохондриях мозга и принимая во внимание литературные данные указывающие, на то, что этот белок мог бы быть 2’,3’-циклонуклеотид-3'-фосфодиэстеразой, мы предприняли попытку идентифицировать 46 кДа фосфобелок и выяснить его функции в митохондриях.