Флуорофоры липофусциновых гранул из клеток ретинального пигментного эпителия глаза человека

• Автор: Яковлева, Марина Андреевна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 135 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Липофусцнновые гранулы

1.1.1. Образование липофусциновых гранул в клетках ретинального пигментного эпителия
1.1.2. Содержание липофусциновых гранул в клетках ретинального пигментного эпителия в зависимости от патологии и возраста

1.1.3. Физико-химические свойства липофусциновых гранул

1.1.3.1. Спектральные характеристики

1.1.3.2. Генерация активных форм кислорода при действии света

1.1.3.3. Спектр действия фотопоглощения кислорода липофусциновыми гранулами и его хлороформным экстрактом
1.2. Флуорофоры липофусциновых гранул
1.2.1. Зрительный цикл. Полностью трянс-ретиналь - источник флуорофоров липофусциновых гранул
1.2.2. Продукты превращения полностью-щрянс-ретиналя
1.2.2.1. №ретинилиден-№регпинилэтаноламин (А2Е) и его производные
1.2.2.2. А2-дигидропиридип-фосфатидилэтаноламин и А2-дигидропиридин-этаноламин
1.2.2.3. Полностыо-транс-ретиналь димер и его производные
1.2.3. Ретинил пальмитат и фототоксичность липофусциновых гранул глаза человека, индуцированная синим светом

1.2.4. Хлороформ растворимые и хлороформ нерастворимые компоненты липофусциновых гранул
1.3. Флуорофоры липофусциновых гранул и аутофлуоресценцня глазного дна как новый неинвазивный метод диагностики глазных заболеваний
1.3.1. Основы и принципы аутофлуоресцентного анализа глазного дна
1.3.2. Особенности, проблемы и перспективы применения
диагностического метода аутофлуорссценцнн глазного дна
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Биологический материал для получения липофусциновых гранул - кадаверные глаза человека
2.2. Выделение липофусциновых гранул из клеток ретинального пигментного эпителия
2.3. Регистрация спектров поглощения и флуоресценции суспензии липофусциновых гранул и их хлороформного экстракта, а также раствора А2Е в метаноле
2.4. Получение хлороформного экстракта из суспензии липофусциновых гранул клеток ретинального пигментного эпителия
2.5. Облучение суспензии липофусциновых гранул и их хлороформного экстракта, а также раствора А2Е в метаноле
2.6. Окисление А2Е в темноте
2.7. Разделение флуорофоров хлороформного экстракта из липофусциновых гранул методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.8. Химический синтез А2Е
2.9. Масс-спсктрометрия А2Е и продуктов его окисления
2.10. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Сравнительный анализ влияния видимого света на спектральные характеристики липофусциновых гранул и синтетического А2Е
3.1.1. Изменение спектров поглощения липофусциновых гранул и
синтетического А2Е при облучении их видимым светом
3.1.2. Изменение флуоресцентных свойств липофусциновых гранул и синтетического А2Е до и после их облучения видимым светом
3.1.3. Спектры возбуждения флуоресценции суспензии липофусциновых гранул
3.2. Изучение механизмов окисления А2Е как модельной системы
3.3. Анализ содержания флуорофоров в хлороформном экстракте из липофусциновых гранул в зависимости от возраста доноров и действия видимого света на ЛГ
3.3.1. Хроматографический анализ хлороформного экстракта из липофусциновых гранул и А2Е в метаноле до и после их облучения видимым светом
3.3.2. Зависимость относительного содержания различных флуорофоров в липофусциновых гранулах от возраста доноров кадаверных глаз без видимых зрительных патологий (см. Приложение

3.4. Изучение флуоресцентных свойств отдельных флуорофоров и/или их групп в составе хлороформного экстракта липофусциновых гранул из клеток ретинального пигментного эпителия
3.4.1. Спектры поглощения суспензии и хлороформного экстракта липофусциновых гранул
3.4.2. Результаты хроматографического анализа хлороформного экстракта из липофусциновых гранул, с использованием спектрофотометрин н изучение спектров поглощения отдельных

триплетное состояние. Фотоакустический эксперимент показал, что основная часть энергии возбуждения диссипирует в тепло, квантовый выход флуоресценции около 0.01 - 0.02 [79]. Спектры и максимумы флуоресценции А2Е зависят от растворителя, смещаясь в красную область при уменьшении полярности растворителя: от 510 нм в метаноле до 615 нм в растворителе Triton Х-100, образующем мицеллы; спектр поглощения при смене полярности растворителя остается практически неизменным. Среда изменяет и квантовый выход флуоресценции - он падает с 0.011 в среде с низкой диэлектрической проницаемостью (Triton Х-100) до 0.002 в среде с е = 37 (ацетонитрил) [80]. Такие изменения авторы объясняют как электростатическим взаимодействием между растворителем и катионом азота в молекуле А2Е, так и образованием эксимеров А2Е, более вероятных в неполярной среде. Показана противоположная тенденция — максимум флуоресценции смещался в коротковолновую область при уменьшении полярности растворителя[75].
Квантовый выход перехода в триплетное состояние не более 0.01 [81]. Переход А2Е в триплетное состояние интересен с точки зрения, возможной генерации этим веществом активных форм кислорода, в частности 102. Триплетное состояние А2Е удалось получить с помощью сенсибилизаторов антрацена и 1-нитронафталена [81]. Оно имеет время жизни порядка 30 мке и максимум поглощения на длине волны 550 нм в метаноле и 540 нм в бензоле. Характерное время образования триплета в бескислородной среде 1.5-3 мке, время жизни 25-40 мке (в зависимости от сенсибилизатора). Кислород является тушителем триплетного состояния А2Е, константа тушения составила 1*109 М'1*1 (100 мкМ 02). Не обнаружено признаков образования А2Е катион-радикалов, которое также сенсибилизируется 1-нитронафталеном. В отсутствие сенсибилизаторов А2Е практически не переходит в триплетное состояние при облучении и не производит ’02 [81]. При облучении А2Е в детергенте образуется неизвестная переходная форма с