Роль белков аксо-глиального комплекса в регуляции структуры и вязкости миелина нервного волокна

• Автор: Родионова, Наталья Николаевна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 237 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Аксо-глиальный комплекс

1.2. Особенности проведения ритмического возбуждения нервом

1.2.1. Подготовка нерва к проведению ПД

1.2.2. Именение светорассеяния нерва при ритмическом возбуждении

1.2.3. Изменение двулучепреломления нерва при ритмическом возбуждении

1.2.4. Изменение состояния воды в нерве при ритмическом возбуждении

1.2.5. Изменение теплопродукции нерва при ритмическом возбуждении

1.2.6. Изменение вязкости миелина и аксолеммы нерва при ритмическом
возбуждении
1.2.7. Изменение вязкости цитоплазмы нерва при ритмическом возбуждении
1.2.8. Изменение поверхностного заряда на мембранах нерва при проведении потенциала действия
1.2.9. Изменение морфологии нерва при ритмическом возбуждении
1.2.9.1. Роль мембраносвязанного Са2+ в миелине
1.3. Изменение ферментативной активности и липидного состава нерва при ритмическом возбуждении
1.4. Регуляция работы ион-транспортирующих систем при изменении вязкости мембран
1.5. Роль клеточных и внеклеточных протеаз в регуляции структуры и функционирования нервного волокна
1.5.1. Внутриклеточные протеазы
1.5.2. Внеклеточные протеазы
1.6. Роль изменения конформации мембранных белков в регуляции состояния нервного волокна
1.7. Регуляция работы ион-транспортирующих систем изменением вязкости мембран, уровня фосфорилирования, изменения внутриклеточного цитоскелета
ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Приготовление препаратов. Растворы и реактивы
2.1.1. Приготовление препаратов миелиновых нервных волокон
2.1.2. Приготовление препаратов из Borrelia burgdorferi sensu stricto*

2.2. Методы исследования
2.2.1. Регистрация амплитуды и скорости проведения потенциала
действия нервного волокна
2.2.2 Микроскопия с освещением по методу светлого поля
2.2.3. Флуоресцентная микроскопия
2.2.3.1. Определение уровня мембраносвязанного Са2+
2.2.3.2. Исследование локализации поверхностных белков Мг9 в нервном волокне
2.2.4. Конфокальная лазерная сканирующая микроскроскопиия
2.2.5. Лазерная интерференционная микроскопия
2.2.5.1. Анализ динамики ОРХ нерва
2.2.6. Спектроскопия комбинационного рассеяния нервного волокна
2.2.6.1. РКР спектроскопия каротиноидов
2.2.6.2. КР спектроскопия фосфолипидов
2.2.7. Метод электронного парамагнитного резонанса
2.2.8. Метод ЯМР-спинового эха*
2.2.9. Хроматографические методы анализа жирных кислот липидов МНВ*
2.2.9.1. Тонкослойная хроматография липидов
2.2.9.2. Газожидкостная хроматография жирных кислот МНВ
2.2.10. Изучение ферментативной системы нерва
2.2.10.1. Определение СОД-активности
2.2.10.2. Определение содержания небелковых тиолов
2.2.10.3. Определение активности каталазы
2.2.11. Статистическая обработка результатов экспериментов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ
Часть I. Исследование влияния мембранных белков на состояние миелина и аколеммы МНВ
3.1. Исследование роли белков в изменениях вязкости миелина и аксолеммы миелинового нервного волокна
3.1.1. Исследование изменений возбудимости и вязкости мембран миелинового нервного волокна при инкубации с проназой Е
3.1.1.1. Исследование изменений амплитуды и скорости проведения ПД при инкубации МНВ с проназой Е
3.1.1.2. Исследование изменений вязкости липидов аксолеммы и миелина нервного волокна при инкубации МНВ с проназой Е
3.1.1.3. Исследование изменений фосфолипидного и жирнокислотного состава липидов нерва при инкубации МНВ с проназой Е
3.1.1.4. Исследование действия проназы Е на конформацию жирнокислотных цепей липидов МНВ
3.1.1.5. Исследование влияния инкубации МНВ в среде с проназой Е на активность ферментов антиоксидантной системы миелинового нерва

3.1.1.6. Исследование изменения времени спин-спиновой релаксации
ядер протонов при инкубации МНВ с проназой Е
Заключение
3.1.2. Исследование изменений возбудимости и вязкости мембран миелинового нервного волокна при инкубации МНВ с парахлормеркурибензоатом
3.1.2.1. Исследование изменений амплитуды и скорости проведения ПД при инкубации МНВ с пара-хлормеркурибензоатом
3.1.2.2. Исследование изменений содержания мембраносвязанного Са2+ при инкубации МНВ с пара-хлормеркурибензоатом
3.1.2.3. Исследование изменения вязкости липидов аксолеммы и миелина при инкубации МНВ с пара-хлормеркурибензоатом
3.1.2.4. Исследование изменений фосфолипидного и жирнокислотного состава при инкубации МНВ с пара-хлормеркурибензоатом
3.1.2.5. Исследование изменений Т2 при инкубации МНВ с пара-хлормеркурибензоатом
3.1.2.6. Исследование влияния инкубации миелинового нерва в среде с пара-хлормеркурибезоатом на активность антиокислителъных
ферментов
Заключение
3.1.3. Исследование изменений возбудимости и состояния липидов мембран МНВ при инкубации с нитропруссидом натрия
3.1.3.1. Исследование действия нитропруссида на электрофизиологические параметры нерва
3.1.3.2. Р1сследование действия нитропруссида на вязкость липидов аксолеммы и миелина нервного волокна
3.1.3.3. Исследование изменений содержания мел1браносвязанного С а2' нерва при действии нитропруссида натрия
3.1.3.4. Исследование изменений состава жирных кислот липидов нерва при действии нитропрусида
3.1.3.5. Исследование изменения время спин-спиновой релаксации ядер (Т2) при инкубации миелинового нерва с нитропруссидом
3.1.3.6. Исследование активности супероксид дисмутазы, каталазы и содержания небелковых тиолов в миелиновом нерве при его инкубацгш
с нитропруссидом
Заключение
3.1.4. Исследование состояния миелинового нервного волокна при изменении вязкости мембранных липидов
3.1.4.1. Исследование влияния длительных изменений вязкости (лидокаин) на нервное волокно
3.1.4.2. Исследование изменения вязкости аксолеммы и миелина при встраивании 16-доксилстеарата
3.1.4.3. Исследование зависимости упорядоченности молекул воды в
ШК и аксоплазме при изменении температуры МНВ
Заключение

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ
Цель работы заключалась в исследовании роли белков аксо-
глиального комплекса в изменениях вязкости и структуры миелина нервного
волокна.
Для осуществления данной цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить изменения ПД, упорядоченности ЖК-остатков ФЛ, уровня “связанной” воды миелина при гидролизе пептидных связей белков аксо-глиального комплекса миелинового нерва (действие проназы Е).
2. Изучить изменения ПД, упорядоченности ЖК-остатков ФЛ, количества мембраносвязанного Са2+ и уровня “связанной” воды миелина при изменении конформации экстраклеточиых участков белков аксо-глиального комплекса миелинового нерва (действие блокатора белковых SH-групп (пХМБ)).
3. Изучить изменения упорядоченности ЖК-остатков ФЛ, количества мембраносвязанного Са2+ и уровня “связанной” воды миелина нервного волокна при блокировании активности К+-каналов и АТФаз.
4. Изучить изменения ПД, упорядоченности ЖК-остатков ФЛ, количества мембраносвязанного Са2+ и уровня “связанной” воды миелина нервного волокна при действии оксида азота (NO).
5. Изучить изменения ПД, упорядоченности ЖК-остатков ФЛ и количества мембраносвязанного Са2+ миелина нервного волокна при действии белка внешней мембраны спирохеты Borrelia burgdorferi (OspA).
6. Исследовать изменения морфологии миелинового нервного волокна и структуры миелина (показателя преломления миелина) в покое и при изменении свойств белков аксо-глиального комплекса.