Культивирование клеток кожи, предназначенных для заместительной терапии, на полимерных плёнках

• Автор: Швед, Юлия Александровна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 162 с. : ил.

Оглавление
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1 Биоматериаловедение - междисциплинарный подход к изучению полимеров
1.2 Полимеры медико-биологического назначения
1. 3 Тканевая инженерия
1. 3. 1 Принципы и методы тканевой инженерии
1.3.2 Основные требования к полимерам в тканевой инженерии
1. 3. 3 Синтетические биодеградируемыс полимеры
1. 4 Строение кожи и способы лечения повреждений кожного покрова
1. 4. 1 Строение кожного покрова
1. 4. 2 Строение коллагена и его свойства
1.4.3 Подготовка клеточного продукта для трансплантаций
1.4.4 Формирование полимерных матриц для культивирования клеток
1. 5 Взаимодействие клеток с полимерной поверхностью скаффолда
1. 6 Модификация полимерного субстрата
1.6.1 Физические способы модификации
1.6.2 Химические способы модификации полимерной поверхности
Глава 2. Объекты и методы исследования
2.1. Приготовление материалов и реагентов
2.1.1 Синтез поли( П,Г-лактида)
2.1.2 Формирование плёнок методом полива из раствора
2.1.3 Получение тонких полимерных плёнок
2.1.4 Гидрофобизация покровных стёкол
2.1.5 Получение пористых плёнок из смеси полилактида (ПЛ) и полиэтиленгликоля (ПЭГ)
2.1.6 Получение коллагена

2.2 Модификация поверхности полилактидных пленок
2.2.1 Нанесение коллагена на полимерный субстрат
2.2.2 Модификация полилактидных плёнок лизином
2.3 Методы исследования
2.3.1 Измерение гидрофильно-гидрофобных характеристик поверхности полимерной плёнки методом пластинок Вильгельми
2.3.2 Оценка количества растворённого ПЭГ по потере массы
2.3.3 Определение концентрации полиэтиленгликоля в водных растворах
2.3.4 Определение оксипролина в коллагене
2.3.5 Определение концентрации коллагена
2.3.6 Выявление структуры коллагена
2. 3.7 Нингидриновый метод анализа
2. 3. 8 Ядерный магнитный резонанс
2. 3. 9 Сканирующая электронная микроскопия
2. 4 Выделение клеток кожи и анализ их поведения на исследуемых субстратах
2.4.1 Выделение и культивирование первичных фибробластов
2.4.2 Выделение и культивирование первичных кератиноцитов
2.4.3. Оценка состояния клеток на полимерных плёнках
2.4.4 Адгезия фибробластов
2.4.5 Анализ структуры актинового цитоскелета
Глава 3. Результаты
3.1. Синтез поли(П,Ь-лактида)
3.2. Получение полимерных плёнок из полилактида разными способами
3.2.1 Плёнки, полученные методом полива из раствора
3.2.2. Полимерные плёнки, полученные на покровном стекле
3.3. Влияние условий получения полимерных плёнок на взаимодействие фибробластов с полимерной поверхностью полилактидной плёнки
3.4. Исследование деградации полилактидных плёнок in vitro
3.5. Исследование деградации полилактидных плёнок in vivo
3.6. Модификация полилактидной плёнки
3. 6. 1. Нанесение коллагена на полилактидную матрицу
3.6.2 Влияние покрытия полимерных пленок коллагеном на поведение культивируемых кератиноцитов
3.7. Формирование пористых плёнок на основе смеси полилактида и полиэтиленгликоля
3.7.1 Исследование скорости растворения ПЭГ
3.7.2 Культивирование кератиноцитов на плёнках, приготовленных на основе смеси ПЛ и ПЭГ
3.7.3 Модификация коллагеном пористых плёнок и культивирование на них кератиноцитов
3.8. Модификация полилактидных плёнок раствором лизина
Глава 4. Обсуждение результатов
Выводы
Список литературы

предназначены или только для циркуляции питательной среды, или для культивирования клеток в трёхмерном пространстве и циркуляции питательной среды. Однако в каждом конкретном случае пористая матрица должна обладать комплексом характеристик, таких как размер и распределение пор, общая пористость системы и т. д.
Примером пористых скаффолдов являются губки (sponges),которые представляют собой пористые системы с вьгеокой степенью взаимосвязанности пор друг с другом, в отличие от пен, в которых поры изолированы. Для целей тканевой инженерии наиболее подходящими являются системы типа губок. Оптимальным является бимодальное распределение пор по размеру - крупные, достигающие 100 и более мкм в диаметре, и мелкие (десятки и сотни нм). На внутренней поверхности крупных пор происходит собственно присоединение клеток к поверхности полимера, их размножение (пролиферация) с последующей интеграцией в ткань. Функция системы мелких пор заключается в реализации циркуляции через них биологической жидкости, за счет чего к клеткам поступают питательные вещества, и осуществляется отвод продуктов метаболизма клеток. Важной характеристикой скаффолдов является степень пористости, то есть доля объема пор по отношению к общему объему изделия. Эта характеристика непосредственно связана с механическими характеристиками скаффолда и его способностью сохранят форму в течение времени, необходимого для формирования интегрированной ткани. В этой ситуации важно соблюсти баланс противоречивых требований механической прочности и устойчивости к внешним воздействиям с одной стороны, и минимальным содержанием структурообразующего полимера в общем объеме скаффолда - с другой.
В зависимости от общих требований, предъявляемых к пористой матрице, а также свойств самого полимерного материала в каждом конкретном случае могут быть использован определённый способ формирования скаффолда