Глипролины меланокортинового ряда: процессы биодеградации и взаимодействия с мембранами клеток мозга

• Автор: Вьюнова, Татьяна Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 153 с. : ил.

Оглавление
Список принятых сокращений
Введение
Цель работы
Научная новизна
Практическая ценность работы
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Эндогенные регуляторные пептиды: роль и функции в организме
1.1. Регуляторы пептидной природы
1.2. Один пептид — несколько функций, одна функция — несколько пептидов
2. Общие черты молекулярного механизма действия пептидных регуляторов
2.1. Биосинтез и биодеградация пептидов
2.2. Лиганд-рецептроные взаимодействия, способы исследования
2.3. Радиолиганд-рецепторный метод анализа
2.4. Связь внутриклеточной сигнализации и пептидной регуляции, роль ионов Са2+
3. Регуляторные пептиды и лекарства на их основе
3.1. Преимущества лекарств на основе регуляторных пептидов
3.2. Проблемы создания лекарств на основе регуляторных пептидов
3.3. Возможные способы ведения препаратов на пептидной основе
3.4. Интраназальное введение лекарств
4. Характеристика семейства меланокортинов
4.1. Эндогенные регуляторные меланокортииы (АКТГ, МСГ, эндорфины)
4.2. Рецепторы меланокортинов, общая характеристика
4.3. Основные физиологические эффекты меланокортинов
4.4. Возможные синтетические модификации меланокортинов
4.4.1 Введение D-аминокислот
4.4.2 Точечные аминокислотные замены
4.4.3. Циклизация молекул
4.4.4. Замена С- и N-концевых участков молекулы
4.4.5 Введение в структуру Pro- содержащих участков
5. Семаке как лекарственный препарат и пептидный регулятор
5.1. Физиологические свойства семакса
5.1.1 Ноотропные эффекты
5.1.2. Иейропротекторные и нейротрофические эффекты
5.1.3. Противоишемическое влияние
5.1.4. Офтальмологические эффекты
5.1.5. Противоязвенный эффект

5.1.6. Коррекция постреанимационных и мнестических нарушений
5.1.7. Профилактические эффекты
5.2. Регуляторный гептапептид и его фрагменты
5.2.1. Семаке и его биодеградация
5.2.2. Свойства фрагментов семакса
6. Заключение
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалы и реактивы
Выделение мембран
Условия проведения синтеза
1. Синтез немеченых пептидов
Синтез Phe-Pro-Gly-Pro из гептапептида MEHFPGP с использованием амино-
аципарипамидазы (Е.С. 3.4.11.2)
Синтез Phe-Pro-Gly-Pro из гептапептида MEHFPGP с использованием лейцин-
аминопептидазы (Е.С. 3.4.11.1)
Синтез His-Phe-Pro-Gly-Pro из гептапептида MEHFPGP с использованием глутамилэндопептидазы Bacillus intermedins
2. Синтез меченых тритием соединении
Синтез Phe-Pro-Gly-[3H]Pro из гептапептида MEHFPGP
Синтез Phe-Pro-Gly-f II]Pro из гептапептида MEHFPGP, окисленного по
метионину
Синтез His-Phe-Pro-Gly-[3Н]Pro из гептапептида MEHFPGP
Синтез His-Phe-Pro-Gly-[3H]Pro из модифицированного гептапептида MEHFPGP.

Изучение деградации [3Н-Рго]глипролинов и арахидоноил-семакса в присутствии
плазматических мембран мозга крысы
Радиорецепторный анализ
Статистическая оценка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Введение
1. Биодеградация глипролинов
1.1. Деградация глипролинов под действием мембранных ферментов
1.2. Введение дополнительных компонентов инкубационного буфера,
снижающих протеолиз семакса
Заключение
2. Биотехнологический способ получения радиоактивно меченых пептидов (обладающих равной удельной радиоактивностью), а также их немеченых аналогов
2.1. Синтез пептидов при помощи различных ферментов протсолиза

2.1.1 Синтез немеченых пептидов
2.2.3 Синтез пептидов на основе модифицированного [3Н]семакса
2.2. Синтез НРРС[3Н]Р при помощи глутамат-специфичной пептидазы
2.2.1 Синтез пентапептида на основе ссмакса, меченного тритием по С-концевому пролину
2.2.2 Синтез распределено меченных ди- и пента- пептидов
2.2.3 Синтез пентапептида на основе модифицированного [3Н]семакса
2.3. Сравнительный анализ радиоактивно меченых пентапептидов,
синтзированных различными способами
Заключение
3. Изучение взаимодействия глипролинов с плазматическими мембранами клеток мозга крысы
3.1. Изучение специфического связывания [3Н]гептапентнда
3.1.1. Локализация мест специфического связывания [3Н]семакса
3.1.2. Взаимодействие [3Н]семакса с мембранами переднего мозга крысы в различных условиях инкубирования
3.2. Изучение специфического связывания НРРС[3Н]Р
3.3. Изучение специфического связывания РС[3Н]Р
3.4. Изучение специфического связывания ЕНРРС[3Н]Р и РРС[3Н]Р
3.5. Некоторые характеристики центров специфического связывания
глипролинов на плазматических мембранах мозга крысы
Заключение
4. Изучение особенностей специфического связывания семакса и пентапептнда ИРРвР с плазматическими мембранами мозга крысы
4.1. Изучение особенностей взаимодействия [3Н)семакса с плазматическими мембранами гиппокампа крысы
4.2. Изучение особенностей взаимодействия НРРС[3Н]Р с плазматическими мембранами гиппокампа крысы
4.3. Сравнение степени сродства гепта- и пента- пептидов к местам их специфического связывания на плазматических мембранах гиппокампа крысы

Заключение
5. Описание возможного механизма взаимодействия семакса с плазматическими
мембранами клеток-мишеней мозга

нейрорецепторов на специфическое связывание цента- и три- пептидов с плазматическими мембранами мозга крысы

отличаться по структуре. Например, аспарагиновая кислота, в отличие от аспарагина, несет отрицательный заряд. Остаток Абп кодируется нуклеотидной последовательностью ААС. Хорошо известно, что при точковых мутациях чаще встречается замена одного пиримидина на другой пиримидин (С на Т или Т на С), или одного пурина на другой пурин (А на в или О на А). Такие замены называются транзицией. Трансверсия, замена пурина на пиримидин или пиримидина на пурин, встречается гораздо реже. Таким образом, анализируя природные пептидные последовательности и меняя аминокислоты по принципу транзиций или трансверсий, синтезируют новые соединения [83]. Иначе говоря, осуществляют перебор точковых мутантов по некритичным для активности пептидов аминокислотным остаткам.
Изучение характеристик пептидных рецепторов также помогает в создании лекарственных средств [84], кроме того, скрининг библиотек протеомикса упрощает поиск пептидов для дальнейших модификаций [85].
Все вновь синтезированные молекулы проверяют на активность, отсутствие побочных эффектов, концентрационную зависимость действия и другие параметры - то есть на возможность создания на их основе лекарственного средства. В результате длительных и затратных исследований, предклинических испытаний (включающих исследования на острую и хроническую токсичность, мутагенную активность, аллергизирующее и иммунотоксическое действие, гормональную активность, тератогенные и эмбриотоксические свойства, местнораздражающее действие), подавляющее большинство молекул так не допускают к медицинскому применению.
Еще одна проблема, возникающая при создании и массовом производстве лекарственных препаратов на пептидной основе, носит более прикладной, технологический характер: иногда, химический синтез биологически
активной молекулы (особенно, если это комплексное соединение, например, пептид и жирная кислота, присоединенная с 14-конца) оказывается довольно