Диагностическая эффективность ELISA и dot-ELISA с антигенами клеточных культур при цистном гидатидозе

• Автор: Сивкова, Татьяна Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.19
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 142 с. : ил

Оглавление
Введение
1. Обзор литературы
1.1. Антигены эхинококка и их характеристика
1.2. Клеточная технология получения антигенов эхинококка
1.3. Применение ELISA и dot-ELlSA для диагностики
гельминтозов
2.Собственные исследования
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Подготовка лабораторной посуды, инструментов и
растворов для проведения культуральной работы
2.1.2. Получение гельминтного материала для культивирования
а) Приобретение цист E.granulosus от людей и
животных
б) Заражение белых крыс протосколексами E.multilocularis, получение вторичных ларвоцист
2.1.3. Приготовление первичной клеточной культуры E.granulosus
и E.multilocularis и проверка ее жизнеспособности. Получение
перевиваемой клеточной культуры
2.1.4. Контроль клеточных метаболитов на стерильность,
безвредность, определение содержания белка
21.5. Проверка инвазивности клеточной культуры E.multilocularis

2.1.6. Определение антигенной активности клеточных
метаболитов E.granulosus и E.multilocularis
2.1.7. Диагностическая эффективность метаболитов клеточных
культур E.granulosus и E.multilocularis
а) Сбор патологического материала от
свиней
б) Исследование сывороток крови свиней в реакции ELISA
в) Исследование сывороток крови людей в реакции ELISA
г) Исследование сывороток крови людей коммерческим тестом “Эхинококк IgG-стрип“
2.1.8. Статистическая обработка результатов
2.1.9. Разработка диагностической тест-системы на основе dot-ELISA
2.1.10. Диагностическая эффективность dot-ELISA при цистном гидатидозе
а) Исследование сывороток крови свиней
б) Исследование сывороток крови людей
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Анализ данных по культивированию протосколексов E.granulosus и вторичных ларвоцист E.multilocularis
2.2.2. Характеристика и контроль метаболитов клеточных культур протосколексов E.granulosus и вторичных ларвоцист E.multilocularis

2.2.3. Отбор и характеристика антигеноактивных метаболитов клеток протосколексов E.granulosus и вторичных ларвоцист E.multilocularis в иммуноферментной реакции
2.2.4. Оценка диагностической эффективности антигенов -метаболитов клеточной культуры при цистном гидатидозе
а) Диагностическая эффективность иммуноферментной реакции с антигенами клеточной культуры E.granulosus при цистном гидатидозе свиней
б) Диагностическая эффективность иммуноферментной реакции с антигенами клеточной культуры Е.тпиШ1оси1аш при цистном гидатидозе свиней
ЕВИНСИ
в) Диагностическая эффективность антигенов клеточной
культуры E.granulosus при цистном гидатидозе
человека 62.
г) Диагностическая эффективность антигенов клеточной
культуры E.multilocularis при цистном гидатидозе
человека 68.
2.2.5. Исследование сывороток крови человека коммерческим
тестом “Эхинококк IgG-стрип“ 72.
2.2.6. Разработка диагностической тест-системы на основе dot-
EL1SA 73.
а) Диагностическая эффективность dot-ELISA с антигеном
цистной жидкости при цистном гидатидозе
человека 76.
б) Диагностическая эффективность dot-ELISA с антигеном
клеточной культуры E.granulosus при цистном гидатидозе
свиней 77.

три месяца соответственно. Кроме того, dot-ELlSA и IFA были более чувствительны на протяжении пяти месяцев наблюдения (Xue Н.с. et al., 1989).
Достаточно высокую чувствительность и специфичность dot-ELISA при фасциолезе отметили Rivera Marrero C.A. et al. (1998). Экскреторно-секреторный антиген фасциол использовали также Rickard L.D. et al. (1995) для определения сывороточных антител против этого паразита у экспериментально зараженных лам.
Dot-ELISA на основе моноклональных антител разработали для выявления антигенов в сыворотке крови крупного рогатого скота при цистицеркозе, вызыванном T.saginatus. Анализ позволял различать животных, имеющих живых цистицерков, от животных, имеющих только мертвые цисты. Надежная диагностика заражения животных, имеющих менее 100 живых цистицерков, была невозможна, но у КРС с более чем 100 живыми цистицерками чувствительность теста была 87,5%, специфичность - 93,5%. Эти значения были аналогичны результатам сэндвич - ELISA (Draelants E. et al., 1995).
Shen Н.Х. et al. (1988) использовали антиген из трихинелл Тб для обнаружения антител в сыворотках пациентов, употреблявших в пищу зараженную Т. spiralis свинину, реакциями LAB-ELISA, непрямой ELISA и dot-ELISA. Перекрестные реакции регистрировали между антигеном Тб и сыворотками от пациентов с острым шистосомозом, что свидетельствует о наличии общих антигенов между T.spiralis и S.japonicum. Все три метода оказались специфическими и стабильными в определении антител. К аналогичному выводу в отношении dot-ELISA пришли Dzebenski Т.Н. et al. (1994), которые применили эту реакцию для выявления циркулирующих паразитических антигенов в сыворотках крыс и пациентов, инвазированных T.spiralis.