Исследование фетальной и материнской внеклеточной ДНК при нормальной беременности и нарушениях развития плода

• Автор: Токарева, Анастасия Григорьевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 0 с. : 121 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Внеклеточные нуклеиновые кислоты в крови человека
1.1.1. Механизмы появления внеклеточных нуклеиновых 13 кислот в крови
1.1.2. Возможные функции внеклеточных нуклеиновых кислот
1.2. Внеклеточные нуклеиновые кислоты плода в крови матери
1.2.1. Происхождение внеклеточной ДНК плода в крови матери
1.2.2. Внеклеточная ДНК плода как маркер для неинвазивной пренатальной диагностики
1.2.3. Внеклеточная ДНК плода как маркер патологии 32 беременности
1.2.4. Внеклеточная фетальная РНК в крови матери
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
2.1. Материал исследования
2.2. Выделение фракций внеклеточной ДНК
2.3. Измерение концентрации ДНК с помощью Hoechst 33258
2.4. Выделение ДНК из фракций крови
2.5. Полимеразная цепная реакция
2.6. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.7. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
2.8. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Особенности циркуляции фракций внеклеточной ДНК в крови
женщин при нормально протекающей беременности
3.2. Концентрация циркулирующей и связанной с клеточной поверхностью внеклеточной ДНК матери и плода при нормальной беременности
3.3. Динамика концентрации фетальной и материнской внеклеточной ДНК в течение беременности
3.4. Влияние возраста беременной женщины на уровень внеклеточной ДНК плода
3.5. Концентрация внеклеточной ДНК при нарушениях развития плода
3.5.1. Уровень фетальной и материнской ДНК в крови беременных женщин, вынашивающих плоды с пороками развития
3.5.2. Концентрация внеклеточной ДНК в крови женщин при ранней гибели плода вследствие хромосомных аномалий
3.6. Соотношение фетальной и материнской внеклеточной ДНК при различных состояниях беременности
3.7. Внеклеточная ДНК плода в крови матери как маркер неинвазивной пренатальной диагностики
3.7.1. Оценка потенциального использования концентрации внеклеточной ДНК в целях выявления нарушений внутриутробного развития плода
3.7.2. Циркулирующая и связанная с клеточной поверхностью фетальная ДНК как маркер для ранней неинвазивной диагностики пола плода
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ А
ПРИЛОЖЕНИЕ Б
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВПР - врожденные пороки развития
ГТЦ - гуанидинтиоцианат
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
МВГТР - множественные врожденные пороки развития
мРНК - матричная РНК
НК - нуклеиновые кислоты
ПЛ - плацентарный лактоген
п.н.(п.о.) - пара нуклеотидов (оснований), т.п.н. - тысяча пар нуклеотидов
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
ФБ - фосфатный буфер
ФГА - фитогемагглютинин
ХГ - хорионический гонадотропин
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
CAT (chloramphenicol resistance gene) - ген устойчивости к хдорамфениколу CGH (comparative genomic hybridization) - сравнительная геномная гибридизация
DMPK (dystrophia myotonica-protein kinase) - ген миотонинпротеинкиназы HELLP (haemolysis, elevated liver enzymes, low platelet count) - синдром, сопровождающийся лизисом эритроцитов, повышенной активностью печеночных ферментов и низким содержанием тромбоцитов в крови HIC-1 (hypermethylated in cancer) - ген, гиперметилированный при раке IGF2 (insulin-like growth factor 2) - инсулиноподобный фактор роста 2 kb - килобаза (1 ООО пар нуклеотидов)
MSP (methylation-specific PCR) - метилспецифичная ПЦР
RASSF1A (Ras association domain family la) - ген Ras-ассоциированного
домена семейства la
SRY (sex-determining region of the Y-chromosome) - регион Y-хромосомы, ответственный за детерминацию пола

таких как преждевременные роды [Leung et al., 1998; Farina et al., 2005], инвазивная плацента [Sekizawa et al., 2002], гиперемезис беременных [Sekizawa et al., 2001b]. В заключение хотелось бы отметить, что, хотя механизмы такого резкого повышения концентрации ДНК плода в материнской крови пока окончательно неясны, ее измерение, несомненно, может служить маркером этих патологических состояний беременности [Шилова, 2002].
1.2.4. Внеклеточная фетальная РНК в крови матери
Обнаружение фетальной ДНК в сыворотке и плазме беременных женщин открыло новые возможности для молекулярной диагностики наследственных заболеваний плода в пренатальном периоде, а также послужило стимулом к поиску других типов НК плода в материнской крови. В 2000 году Рооп с соавторами продемонстрировали присутствие мРНК фетального происхождения в крови беременных женщин, вынашивающих плоды мужского пола [Рооп et al., 2000]. Кроме того, было показано, что фетальная РНК, циркулирующая в крови матери, представлена, главным образом, во внеклеточной форме. Частота выявления РНК плода в материнской плазме, подобно фетальной ДНК, возрастала с течением беременности и составила 22% и 63% в I и III триместрах беременности, соответственно. В дальнейшем было установлено, что главным источником РНК плода в крови матери также являются клетки плаценты [Ng et al., 2003]. Так, в крови беременных женщин авторы исследовали уровень мРНК транскриптов хорионического гонадоторопина (ХГ) и плацентарного лактогена (ПЛ), которые, как известно, продуцируются клетками плаценты. В результате анализа было показано увеличение концентрации мРНК ПЛ и снижение мРНК ХГ со сроком беременности, что является отражением динамики уровней соответствующих белков, определяемых в сыворотке женщин на разных сроках беременности. Кроме того, РНК-транскрипты ПЛ быстро элиминировались из крови беременных вскоре после родов: у 70%