Изменения радиочувствительности в поколениях облученных клеток млекопитающих

• Автор: Лизунова, Екатерина Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
1. Обзор литературы
1.1. Факторы, определяющие чувствительность клеток
к воздействию ионизирующего излучения
1.2. Изменения клеточной радиочувствительности после
облучения в малых дозах
2.Материалы и методы
Лимфоциты крови: выделение,
условия культивирования и облучения
Культура клеток:
условия культивирования и облучения
Экспериментальные животные: облучение, отбор биоматериала
Метод электрофореза ДНК единичных клеток
Анализ доли клеток с высоким содержанием фосфорилированного гистона
Н2АХ
Огенка доли погибших клеток
Статистический анализ полученных данных
3. Результаты исследований и их обсувдение
3.1.Индукция двунитевых разрывов ДНК и репарация ДНК от них в делящихся лимфоцитах крови
человека, облученных в адаптирующей дозе
3.2.Изменения поврежденности генома и чувствительности к образованию ДР ДНК при тестирующем
облучении в поколениях облученных клеток линии СНО

3.3.Изменения радиочувствительности ДНК лейкоцитов крови и
клеток селезенки мышей в течение хронического облучения
Заключение
Выводы
Список использованной литературы
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. Открытие таких эффектов воздействия ионизирующего излучения как снижение чувствительности к последующему облучению (адаптивный ответ) или повышение радиочувствительности (гиперчувствительность к облучению) заставило пересмотреть патофизиологические механизмы формирования отдалённых эффектов радиационного воздействия (Mothersill, Seymour, 2000; Пелевина и др., 2003). Предполагается, что облучение изменяет состояние клеточных защитных механизмов: систем антиоксидантной защиты, репарации ДНК, регуляции клеточного цикла и апоптоза (Пелевина и др., 2000; Серебряный и др., 2004). Многие исследователи считают, что механизмы изменения клеточной радиочувствительности тесно взаимосвязаны с механизмами индукции и реализации другого эффекта облучения - радиационно-индуцированной нестабильности генома (Пелевина и др., 2003; Okada et al., 2007; Seoane et al., 2007). Этот радиобиологический феномен проявляется в том, что часть клеток, выживших после облучения, может давать функционально измененное потомство, в котором с высокой частотой на протяжении многих поколений возникают de novo аберрации хромосом и генные мутации, в ряде случаев приводящие к повышенной клеточной смертности путем апоптоза (Мазурик и Михайлов 2001, 2004). Как и всякое биологическое явление, нестабильность генома может иметь как негативное (амплификация генов, мутации, дестабилизация хромосом, неопластическая трансформация и др.), так и позитивное значение для биологической системы (формирование гипервариабельных участков

Всего на лимфоцитах крови человека были проведены 3 независимых эксперимента. При обработке данных использовали средние значения.
Культура клеток: условия культивирования и облучения.
В работе использовали культуру эпителиальных клеток яичников китайского хомячка (линия СНО). Время удвоения клеточной популяции -16-18 ч. Схема эксперимента представлена на рис. 7.
Для культивирования клеток применяли стандартную полную среду ОМЕМ, содержащую 10 % фетальной сыворотки крупного рогатого скота (ИЗБ), 1 % Ь-глютамина и антибиотики (пенициллин со стрептомицином). Выращивание клеток проводили в стандартном ССЬ-иикубаторс при 37 °С в атмосфере с 5 % содержанием С02. Для экспериментов клетки высевали в пластиковые культуральные флаконы (75 см2, полистирен) в концентрации ~2 млн. клеток в полной среде (15-20 мл на флакон) и оставляли в СОг-инкубаторе до полного прикрепления клеток к субстрату и появления делящихся клеток. Пересев клеток проводили каждые 2-3 суток в фазе экспоненциального роста. Для проведения анализов клетки снимали с флаконов 0,025%-ным раствором трипсина с ЭДТА, центрифугировали 10 мин при 1000 об/мин, супернатант удаляли, клетки ресуспендировали в оставшемся растворе и добавляли свежую среду до концентрации 1 млн. клеток в 1 мл суспензии.
Клетки подвергали воздействию у-излучения 60Со в дозах 1 Гр и 10 Гр (в зависимости от условий эксперимента) при мощности поглощенной дозы 1 1'р/мин (облучательная установка«Алтай», Россия).