Определение лабильных аналитов и продуктов их метаболизма методами ГХ-МС и ВЭЖХ

• Автор: Данилюк, Александра Александровна
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 129 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1 Л. Применение высокоэффективных вариантов газожидкостной и жидкостной хроматографии для анализа биологических образцов: достоинства и недостатки
1.2. Твердофазная экстракция как метод разделения и концентрирования компонентов проб

1.3. Жидкостно-жидкостная экстракция

1.4. Бенсультап

1.5. Дротаверин (Но-шпа)

1.6. ' Кветиапин (Сероквель)

Заключение по главе

Г ЛАВА 2. Объекты и методы исследования

2.1. Основное (хроматографическое) оборудование
2.2. Дополнительное оборудование
2.3. Характеристика объектов исследования и реактивов
2.4. Статистическая обработка и аппроксимация
экспериментальных данных
ГЛАВА 3. Использование среднеполярной фазы
(50% фенилдиметилполисилоксан) для подтверждающих определений.
Корреляционный расчет индексов удерживания
ГЛАВА 4. Определение нереистоксина, его производных и метаболитов. Метод твердофазной экстракции
4.1. Бенсультап
4.2. Нереистоксин и продукты его окисления
4.3. Метаболиты нереистоксина
Заключение по главе 4
ГЛАВА 5. Определение дротаверина и продуктов его окисления в скрининговом анализе

5.1. Продукты окислительной деградации дротаверина
5.2 Применение метода ГХ-МС для определения дротаверина и
идентификации продуктов его окисления
5.3. ГХ-МС в исследовании термолабильных производных дротаверина
5.4. Метод ВЭЖХ
5.5. Пробоподготовка биообразцов
Заключение по главе
ГЛАВА 6. Особенности выбора метода определения кветиапина в биообъектах
6.1. ГХ-МС
6.2. ВЭЖХ
6.3. Пробоподготовка биобразцов
Заключение по главе
Выводы
Литература
Приложение

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность исследования. Расширение возможностей применения метода газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС) для скринингового определения как можно более широкого класса соединений, имеющих токсикологическое, наркологическое и судебно-химическое значение крайне актуально. Острота проблемы связана с непрерывным увеличением числа подобных аналитов, нередко характеризующихся малой химической и термической стабильностью, что приводит к возникновению затруднений при проведении пробоподготовки и газохроматографического определения. Иногда о наличии в пробе исходных веществ можно судить только по продуктам их превращений.
Удешевление оборудования ГХ-МС за счет усовершенствования и увеличения производства соответствующей аппаратуры привело к значительному распространению данного метода. Несмотря на то, что в настоящее время в результате выполнения ряда федеральных целевых программ в стране существует значительный парк хромато-масе-спектрометров, их полноценное применение затруднено в связи с отсутствием соответствующего методического обеспечения. Поэтому разработка унифицированных способов определения большого количества подконтрольных соединений (скрининг), включающая формирование масс-спектральных библиотек удерживания для распространенных хроматографических фаз является необходимой и насущной задачей настоящего времени.
Сравнительная простота и надежность идентификации соединений с помощью ГХ-МС делает выгодным применение данного метода даже в случае невозможности определения самих исходных соединений, вследствие их термолабильности или биотрансформации в организме человека. Значительная часть данной работы посвящена вопросам модификации исходных соединений, позволяющей дальнейшее определение продуктов их

Режим II (для разделения близко элюирующихся аналитов):
- для слабополярных фаз (HP-5, HP-5ms и EVDX-5ms) - 50°С (0.5 мин), 99°С/мин (100°С, 1 мин), 15/мин (280°С, 15 мин).
- для среднеполярной фазы (DB-17ms) - 50°С (0.5 мин), 99°С/мин (100°С, 1 мин), 9/мин (280°С, 15 мин).
Все хроматографы были оснащены автоматическими пробоотборниками ALS7683 (Agilent Technologies). Объем вводимой пробы 1 мкл.
3. Жидкостный модульный хроматограф 1200 (Agilent Technologies) с бинарным насосом G1312A и диодно-матричным детектором (ДМД) G1315B. Разделение выполняли с помощью тандема, состоящего из форколонки (4.6 мм х 5 мм, 5 мкм) и разделительной колонки SB-18 (4.6 мм х 150 мм, 5 мкм), заполненных обращено-фазовым (Cjg) сорбентом и термостатированных при 25°С. Скорость потока подвижной фазы 1 мл/мин, объем вводимой пробы 10 мкл.
2.2. Дополнительное оборудование
ИК-спектры (область 4000-400 см'1) регистрировали на спектрометре FTS Scimitar 2000 (Digilab) в таблетке бромида калия. При работе с соединениями, очищенными методом ВЭЖХ, применяли следующую методику: выделенную фракцию разбавляли водой в 3 раза и
экстрагировали в хлороформ. После полного упаривания растворителя в струе воздуха при температуре не выше 45 °С сухой остаток растворяли в 100-200 мкл хлороформа и наносили на порошок КВг, после чего упаривали без нагревания при перемешивании и готовили таблетку.
УФ-спектры регистрировали на спектрофотометре 8453 (Agilent Technologies)c применением кювет с толщиной поглощающего слоя 10мм.