Применение оптико-спектральных методов в исследованиях компонентов сыворотки крови

• Автор: Власова, Ирина Михайловна
• Шифр специальности: 01.04.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 184 с. : ил.

Глава 1. Оптические методы исследования биомакромолекул (литературный обзор)
§1.1. Строение белковых молекул и их свойства
§1.2. Состав плазмы крови и функции основных компонентов плазмы
крови высших млекопитающих
§1.3. Динамическое рассеяние света. Исследование биологических объектов (определение размеров и формы рассеивающих свет
частиц) с помощью лазерной корреляционной спектроскопии
§1.4. Применение статического рэлеевского рассеяния света в
растворах для определения массы биомакромолекул
§1.5. Исследование физико-химических свойств биологических объектов с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния
света
§1.6. Применение электронной УФ спектроскопии (спектры люминесценции) для исследования свойств биологических
систем
Глава 2. Методическая часть эксперимента
§2.1. Приготовление объектов исследования (растворы белков, растворы сыворотки крови, ишемическая процедура)
§2.1.1. Приготовление растворов сывороточного альбумина человека для исследования белковой агрегации в присутствии
соли тяжёлого металла (СвС1)
§2.1.2. Приготовление растворов сывороточного альбумина человека для исследования ДСН - вызванной денатурации и
тепловой денатурации белка
§2.1.3. Приготовление сыворотки крови животных для

исследования ишемического воздействия на её компоненты
§2.2. Экспериментальная установка и методика эксперимента для
исследования динамического и статического рассеяния света
§2.3. Экспериментальная установка и методика эксперимента для
исследования комбинационного рассеяния света
§2.4. Экспериментальная установка и методика эксперимента для исследований сыворотки крови люминесцентно - спектральным анализом
Глава 3. Исследование агрегации молекул сывороточного альбумина человека в присутствии соли тяжёлого металла (хлорида цезия СвС1) методами лазерной спектроскопии
§3.1. Лазерная корреляционная спектроскопия процессов агрегации сывороточного альбумина плазмы крови человека в присутствии соли
тяжёлого металла (СвС!)
§3.2. Исследование аминокислотного механизма агрегации сывороточного альбумина плазмы крови человека в присутствии соли тяжёлого металла (СвСЛ) методом спектроскопии комбинационного
рассеяния света
Глава 4. Корреляционная спектроскопия рассеянного света ДСН - вызванной и тепловой денатурации сывороточного альбумина человека
§4.1. Исследование денатурации сывороточного альбумина плазмы крови человека в присутствии ионного детергента додецилсульфата
натрия (ДСН) методом динамического рассеяния света
§4.2. Изучение тепловой денатурации сывороточного альбумина при различных значениях pH буферных растворов методом динамического рассеяния света
Глава 5. Исследование повреждающего действия ишемии на компоненты сыворотки крови оптико - спектральными методами
§5.1. Определение размеров компонентов сыворотки крови

(липопротеинов низкой плотности) методом корреляционной спектроскопии рассеянного света для оценки повреждающего
действия ишемии
§5.2. Определение молекулярной массы и плотности липопротеинов низкой плотности здоровой и ишемической сыворотки крови
методом статического рэлеевского рассеяния света
§5.3. Исследование повреждающего действия ишемии на компоненты сыворотки крови методом спектроскопии комбинационного
рассеяния света
§5.4. Изучение повреждающего воздействия ишемии на сыворотку
крови животных с помощью люминесцентного анализа
Основные результаты и выводы
Список цитируемой литературы
Количественный анализ по спектрам люминесценции основывается на прямо пропорциональной зависимости интенсивности люминесценции от концентрации люминесци рующего вещества в растворе.
Изучение вида спектров люминесценции, их интенсивности нашло широкое применение в медицинских и биологических исследованиях. Люминесценция биологических объектов может быть собственной (первичная люминесценция) или возникать за счёт добавления в анализируемую систему специальных веществ (меток) или при химической модификации уже имеющихся веществ (вторичная люминесценция).
Собственная люминесценция простых белков (максимумы в области 340-360 нм) обусловлена наличием аминокислот - фенилаланина, триптофана и тирозина Максимумы флуоресценции фенилаланина, тирозина и триптофана имеют место при 282, 303, 348 нм, соответственно. Максимум флуоресценции триптофана варьирует от 330 до 350 нм в зависимости от локализации триптофана в белковой молекуле. Положение максимума флуоресценции триптофана может изменяться при варьировании pH среды от 340 до 350 нм. В сложных белках собственной люминесценцией обладают некоторые коферменты, например, флавины (520 нм), восстановленные пиридиннуклеотиды (440 нм). В частности, восстановленные ниридиннуклеотиды при возбуждении УФ - светом флуоресцируют в синей области спектра (440 нм), а окисленные - не флуоресцируют. Это явление позволяет исследовать молекулярные механизмы работы цепи переноса электронов в митохондриях, целых клетках и даже тканях, изучать кинетику биохимических реакций in vivo. Собственная люминесценция наблюдается у витаминов А, Вб, Е, у многих лекарственных препаратов.
Спектры люминесценции многих биологических объектов изменяются при изменении длины волны возбуждающего света, поскольку люминесцировать может несколько компонентов сложной биологической системы. Экспериментальное изучение люминесценции в настоящее время