Иммунобиологические свойства вакцинных штаммов метапневмовируса птиц

• Автор: Бочкарев, Владимир Сергеевич
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 141 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
1. Обзор литературы
1.1. Метапневмовирусная инфекция птиц
1.1.1. Распространение и ущерб, причиняемый болезнью
1.1.2 Биологические свойства метапневмовируса птиц
1.1.2.1. Морфологическая структура метапневмовируса птиц
1.1.2.2. Физико-химические свойства метапневмовируса птиц
1.1.2.3. Патогенность метапневмовируса птиц
1.1 ..2.4. Способность метапневмовируса к репликации в культурах клеток
1.1.2.5.Антигенная специфичность метапневмовируса птиц
1.1.3. Эпизоотологические особенности болезни
1.1.4. Симптомы болезни и патологоанатомические изменения
1.1.5. Диагностика болезни
1.1.6. Профилактика метапневмовирусной инфекции птиц
1.1.7. Заключение
2. Собственные исследования
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Материалы исследований
2.1.2. Методы исследований
2.2. Результаты собственных исследований
2.2.1. Патогенные свойства вакцинных штаммов метапневмовируса
2.2.1.1. Изучение патогенности для куриных эмбрионов (РсЬе-признак)
2.2.1.2. Изучение патогенности для цыплят (РсБ-признак)
2.2.2. Биологические признаки метапневмовируса, связанные с особенностями внутриклеточной репликации
2.2.2.1.Изучение цитопатогенной активности вакцинных штаммов метапневмовируса
2.2.2.2. Изучение способности вакцинных штаммов 8544 и УС-03 к репродукции в клетках Уего при различной температуре

(Яс1тс-признак)
2.2.2.3. Изучение способности вакцинных штаммов к индукции
интерферона и их чувствительности к интерферону
2.2.3. Признаки вакцинных штаммов метапневмовируса, обусловленные
свойствами поверхностной структуры вируса
2.2.3.1. Изучение чувствительности метапневмовируса птиц к некоторым физическим и химическим факторам
2.2.3.1.1. Изучение терморезистентности (156- признак)
2.2.3.1.2. Чувствительность метапневмовируса птиц к действию формальдегида ( Р- признак)
2.2.3.1.3. Чувствительность вируса к действию димерэтиленимина
2.2.3.1.4. Изучение антигенных свойств вакцинных штаммов метапневмовируса птиц
2.2.3.1.5. Изучение антигенной специфичности вируса (А£-признак) и степени нейтрализации специфической антисывороткой (Ап-признак)
2.2.3.1.6. Изучение иммуногенной активности вакцинных штаммов метапневмовируса птиц
3. Обсуждение результатов исследований
Выводы
Практические предложения
Список литературы
Приложение

Список сокращений
ИП иммунопероксидазное окрашивание
ИФ иммунофлуоресценция
ИФА иммуноферментный анализ
КЭ куриные эмбрионы
МПВ метапневмовирус
МГГВИ метапневмовирусная инфекция
ПЦР полимеразная цепная реакция
PH реакция нейтрализации
СПФ свободные от патогенной флоры
СОГ синдром опухшей головы
ТОК тканевая органная культура
ТЦД5о/см3 50% тканевая цитопатогенная доза
ТЦД цитопатогенное действие
ФЭК фибробласты эмбрионов кур
ART avian rhinotracheitis (ринотрахеит птиц)
APV Avian pneumovirus (пневмовирус птиц)
ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
(твердофазный иммуноферментный анализ) lg логарифм по основанию
МаЬ моноклональные антитела
SHS swollen head syndrome (синдром опухшей
головы)
TRT turkey rhinotracheitis (ринотрахеит индеек)
Vero перевиваемая линия клеток почки зеленой
мартышки

было вытеснено методикой ELISA (Grant et al.,1987; Chettle & Wyeth, 1988;Gerrard et al., 1990).
Реакция нейтрализации используется для диагностики МПВИ птиц, но гораздо реже, чем ELISA, хотя было показано, что эти два метода обладают одинаковой чувствительностью (Baxter-Jones et al., 1989). Как правило, реакция серонейтрализации не применяется для мониторинга ответной реакции на вакцинацию. Реакцию нейтрализации выполняли во множестве систем, включающих ТОК (Cook et al., 1993 b), тканевую культуру ФЭК, клетки Vero (Б.Б. Трефилов с соавт. 2011; Л.Ю. Данко, 2011; Giraud et al., 1986; Redmann et al., 1991; Williams et al., 1991) и клетки MA-104 (Toquin et al., 2000).
Eterradossi et al. (1995) обратили внимание на важность выбора антигена для ELISAs. Неудовлетворительный антиген может способствовать получению ложно отрицательного диагноза или кажущейся неиммуногенности вакцины. Необходимо проведение большого объема работы по определению того, какие антитела обнаруживаются различными ELISA и можно ли разработать наборы способные обнаруживать антитела ко всем штаммам, или в качестве альтернативы, к различным подтипам. Необходимо помнить, что, несмотря на все удобства определения антител в ELISA, полученные результаты могут быть недостоверными показателями иммунитета. Но до тех пор, пока мы не будем иметь методик определения клеточно-опосредованного иммунитета, которые будут в равной степени просты для исполнения, мы будем доверять традиционным ELISA.
В настоящее время доступно, по крайней мере, два различных типа коммерческих EL1SA наборов. Первый тип использует планшеты с сорбированным неочищенным или очищенным вирусом. Тестируемую сыворотку вносят на планшет и позволяют реагентам взаимодействовать. Затем добавляют антиглобулин, специфичный для вида птицы и помеченный ферментом, и далее добавляют хромоген. Если в тестируемой сыворотке имеются специфические антитела, энзим-меченый антиглобулин будет