Экспрессия генов, контролирующих водно-солевой баланс в ткани почки гипертензивных крыс НИСАГ

• Автор: Абрамова, Татьяна Олеговна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 150 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Артериальная гипертония
1.2. Развитие гипертонической болезни иод действием стресса
1.3. Роль почки в развитии гипертонии
1.3.1. Изменения в системе водно-солевого обмена
1.3.2. Изменения нейрогенной активности
1.3.3. Изменение сосудистого сопротивления
1.4. Исследование артериальной гипертензии на моделях животных
1.4.1. Генетические модели спонтанной гипертонии
1.4.2. Генетические модели гипертонии, провоцируемой средовыми факторами
1.5. Современные молекулярно-генетические методы изучения ГБ
1.5.1 Метод картирования генов количественных признаков QTL
1.5.2. Экспрессионные микроматрицы
1.6. Функциональные и морфологические особенности крыс линии НИСАГ
1.6.1 Функциональные особенности системы ГГАС у крыс НИСАГ
1.6.2. Функциональные и морфологические особенности почек
у крыс НИСАГ
1.7. Гены кандидаты гипертонической болезни
1.7.1. Гены ионных транспортеров
1.7.2. Ген Mir (минералокортикоидный рецептор)
1.7.3. Ген СотI (катехол-О-метилтрансфераза)
1.7.4. Г ены Egf и Egfr (эпидермальный фактор роста и его рецептор)
1.7.5. Ген Ephxl (эпоксидгидролаза 2) 58 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Экспериментальные животные
2.2. Олигонуклеотиды
2.3. Реактивы
2.4. Выделение суммарной РНК из тканей крыс и удаление хромосомной
ДНК из препаратов РНК
2.5. Электрофоретический анализ нуклеиновых кислот и амплифицированных
ПЦР фрагментов
2.6. Спектрофотометрический анализ количества РНК

2.7. Обратная транскрипция РНК для ПЦР в реальном времени
2.8. ПЦР со специфическими праймерами
2.9. Элюция фрагментов ДНК из агарозы
2.10. Переосаждение ПЦР продукта с полиэтиленгликолем (ПЭГ 6000)
2.11. Полимеразная цепная реакция в реальном времени
2.12. Секвенирование
2.13. Переосаждение изопропанолом
2.14. Анализ экспрессии генов на микроматрицах
2.15. Статистический анализ 73 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Уровень артериального давления
3.2. Результаты анализа микроматриц
3.2.1. Анализ межлинейных различий в покое
3.2.2. Анализ межлинейных различий после воздействия стресса
3.3. Результаты измерения уровня экспрессии мРНК гена М1г
3.4. Результаты измерения уровня экспрессии мРНК генов а-ЕЫаС и /З-ЕИаС
3.5. Результаты измерения уровня экспрессии мРНК гена ЕрИх2
3.6. Результаты измерения уровня экспрессии мРНК гена Е$ф'
3.7. Результаты измерения уровня экспрессии мРНК гена Е%[
3.8. Результаты измерения уровня экспрессии мРНК гена СотI
3.9. Поиск полиморфизмов в последовательности мРНК гена Сот1
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ артериальная гипертония
АД артериальное давление
AI ангиотензин I
АН ангиотензин II
АКТГ адренокортикотропный гормон
ГГАС гипоталамо-гипофизарпо-адренокортикальпая система
ГБ гипертоническая болезнь
н. нуклеотид
НИСАГ наследуемая индуцируемая стрессом артериальная
гипертензия, (название линии крыс)
ОРС открытая рамка считывания
п.н. пары нуклеотидов
ПОМК проопиомеланокортин
ПЭГ полиэтилепгликоль
П1 первый промотор
ПГ простагландины
РААС ренип-ангиотепзин-альдостероновая система
РТК рецепторная тирозипкиназа
ССС сердечно-сосудистая система
СНС симпатическая нервная система
Трис трис(гидроксимет ил)аминометан
т.п.н. тысячи пар нуклеотидов
ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
ЮГА юкстагломеруляриый аппарат
Асе ангиотензин превращающий фермент
Comt катехол-О-метилтрапсфераза,
DPI Dahl hypertensive rats, гипертензивная линия крыс Dahl

У крыс НИСАГ изменен также метаболизм глюкозы и липидов. Активность гексокиназы повышена в печени крыс НИСАГ по сравнению с крысами Вистар, что свидетельствует об увеличении потока глюкозы в клетки. Однако, глюкоза не запасается в виде гликогена, так как его содержание в гепатоцитах крыс НИСАГ снижено. Сочетание низкого уровня иммуиореактивного инсулина и высокой концентрации свободных жирных кислот в крови, вероятно, приводит к торможению гликолиза и окислению глюкозы в цикле Кребса, а это, в свою очередь, создает избыток глюкозо-6-фосфата (Шорин и соавт. 1990Ь).
Сахарная нагрузка выявила снижение толерантности к глюкозе крыс НИСАГ. Таким образом, генетически обусловленное повышение активности симнатоадреналовой и тиреоидпой систем у крыс НИСАГ приводит к снижению уровня иммуиореактивного инсулина в крови, активации липолиза и нарушению толерантности к глюкозе (Шорин и соавт. 1990Ь).
Лимфатическая система крыс НИСАГ тоже изменена (Шорин и соавт. 1990а). Снижена масса и общая площадь сечения тимуса за счет уменьшения размеров как коркового, так и мозгового вещества, а доля соединительной стромы увеличена. В междольковых перегородках и капсулах тимуса встречаются в большом количестве жировые клетки. В основании септ и больших трабекул наблюдается скопление плазматических клеток, эозинофильных гранулоцитов, тучных клеток и макрофагов. Инфильтраты из плазматических клеток часто располагаются между слоями капсулы, а также между внутренним слоем капсулы и периферией коркового вещества. Кроме этого, плазматические клетки в виде крупноочаговых и мелкоочаговых скоплений присутствуют па границе коркового и мозгового вещества и в мозговом веществе (Шорин и соавт. 1990Ь). В состав плазмоцитарных очагов входят плазмобласты (в том числе в состоянии митоза), незрелые и зрелые плазматические клетки, клетки Мота. Развитие активной плазмоцитарной реакции свидетельствует о наличии антигена в паренхиме и строме тимуса. Следует отметить скопления эпителиальных клеток вокруг септальных и,