Активация опухолевого супрессора p53 при ингибировании III комплекса дыхательной цепи митохондрий

• Автор: Хуторненко, Анастасия Александровна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 117 с. : ил.

Содержание
I. ВВЕДЕНИЕ
II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Структура онкосупрессора р53
Механизмы деградации и стабилизации р53 в клетке
Причины индукции р53
Последствия индукции р53
III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Индукция р53 в ответ на ингибирование III комплекса ДЦМ
Последствия ингибирования III комплекса ДЦМ
Причина индукции р53 в ответ на ингибирование III комплекса ДЦМ
Механизм стабилизации р53 при ингибировании III комплекса ДЦМ
V. ВЫВОДЫ
VI. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ARE (antioxidant response element) - участок ДНК, регулирующий индуцируемые при окислительном стрессе гены
XRE (xenobiotic response element) - участок ДНК, регулирующий гены, индуцируемые в ответ на действие ксенобиотиков
СВР (CREB-binding protein) - коактиватор транскрипции CDK - циклин-зависимые киназы
CREB - белковый фактор, связывающийся с CRE (cAMP Response Element)
ССТ - СТР:фосфохолин-цитидилтрансфераза DHODH, ДГОДГ - дигидрооротат дегидрогеназа FBS - бычья эмбриональная сыворотка FITC - флуоресцеинизотиоцианат HDAC - гистоновая деацетилаза HRP- пероксидаза хрена
LF2000 - реагент для трансфекции Lipofectamine 2000 lue - ген люциферазы светлячков NAC - N-ацетил цистеин
NMP, NDP и NTP - нуклеотид моно-, ди- и трифосфаты
NQOl - NAD(P)H:xhhoh оксидоредуктаза
NQ02 - NRH:xhhoh оксидоредуктаза
NLS - сигнал ядерной локализации
NES - сигнал экспорта из ядра
ММП - митохондриальный мембранный потенциал
ONPG - о-нитро-фенил-Ь—D-галактопиранозид
р21 - ингибитор циклин-зависимых киназ p2iWafl/ClP|
PALA - N-phosphonacetyl-L-aspartate PtdCho - фосфатидилхолин PrI - пропидий иодид Pu - пурин Ру - пиримидин SDS - додецилсульфат натрия siRNA - короткая интерферирующая РНК shRNA - короткая шпилечная РНК
гУАО-йпк - фторметилкетон карбобензокси-валил-аланил- аспарагиновой кислоты
АФК - активные формы кислорода
Г АТ - гистоновые ацетилтрансферазы
ДМСО - диметилсульфоксид
ДСН - додедилсульфат натрия
ДЦ - дыхательная цепь
ДЦМ - дыхательная цепь митохондрий
мАТ - моноклональные антитела
ПААГ - полиакриламидный гель
ПЭГ - полиэтиленгликоль
ТЕМЕД - N. N. >Г, ТР-тетраметилендиамин
т.п.н. - тысяча пар нуклеотидных остатков
Трис - трис(гидроксиметил)аминометан
ТХУ - трихлоруксусная кислота
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат
впоследствии перевариваются. Благодаря аутофагии клетка обновляется, переваривая в лизосомах поврежденные органеллы, регулирует баланс между катаболическими и анаболическими процессами, и в случае нехватки питательных веществ аутофагия, поставляя необходимые для пластического обмена соединения, способствует выживанию клетки. В случае избыточной аутофагии клетка погибает [68].
Механизмы апоптоза
При классическом апоптозе происходит активация каскада протеиназ, называемых каспазами (цистеиновые протеазы, специфичные к остатку аспарагиновой кислоты), которые расщепляют ограниченный набор ключевых белков клетки, что в конечном итоге приводит к клеточной смерти.
В здоровых клетках каспазы находятся в неактивном состоянии и активируются только под действием апоптотических факторов, в качестве которых могут выступать заражение патогенами, стрессы, вызывающие внутриклеточные повреждения, или сигналы, связанные с развитием организма. Каспазы животных синтезируются в форме неактивных трехчастных проэнзимов, в состав которых входит Ы-концевой продомен, большая субъединица и малая субъединица на С-конце. При процессинге происходят протеолитические разрезания исходного зимогена в определенных участках цепи после остатка аспарагиновой кислоты. В ходе процессинга продомен утрачивается. Известно, что активные формы каспаз представляют собой комплекс (тетрамер), состоящий из двух больших и двух малых субъединиц. В формировании активного центра участвуют большая и малая субъединицы, при этом малая субъединица определяет субстратную специфичность каспазы.
Различают инициаторные и исполнительные каспазы. Инициаторные каспазы активируются в процессе индукции апоптоза и осуществляют процессинг эффекторных каспаз, гидролизующих клеточные субстраты. По способу индукции выделяется два основных пути апоптоза - внешний (рецепторный или инструктивный) и внутренний (митохондриальный) (Рисунок 14) [67].