Диссертация на тему "Основные механизмы формирования и персистенции бакуловирусных инфекций у массовых видов лесных насекомых-фитофагов", скачать бесплатно автореферат по специальности 03.00.09

Содержание
Страницы

Список сокращений

Введение.

Глава 1. Объекты и методы исследований

1.1. Объекты исследований.

1.2. Культивирование насекомых на ИПС.

1.2.1. Сбор яйцекладок в очагах массового размножения и их хранение.

1.2.2. Стерилизация поверхности яиц

1.2.3. Приготовление питательной среды.

1.2.4. Культивирование гусениц.

1.2.5. Сбор и содержание куколок.
1.2.6. Культивирование имаго.
1.3. Культивирование насекомых на естественном корме.
1.4. Инфицирование насекомых вирусом и активация латентной вирусной инфекции
1.5. Диагностика ядерного полиэдроза.
1.6. Выделение и очистка вируса
1.7. Идентификация вирусных изолятов.
1.8. Идентификация скрытой вирусной инфекции у насекомых
1.9. Мониторинг непарного шелкопряда и шелкопрядамонашенки
в очагах массового размножения.
1 Применение ВЯП для ограничения численности непарного шелкопряда
1 Ограничение численности шелкопрядамонашенки.
1 Планирование экспериментов и статистическая обработка
данных.
з
Глава 2. Совершенствование методов лабораторного культивирования непарного шелкопряда
2.1. Оптимизация ИПС.
2.2. Разработка методики культивирования непарного шелкопряда в лабораторных условиях.
2.3. Получение лабораторных культур непарного шелкопряда
2.4. Заключение
Глава 3. Латентность бакуловирусов. Исследование генотипического состава вирусных популяций ВЯП непарною шелкопряда и шелкопрядамонашенки
3.1. Преодоление насекомыми вирусной инфекции. Диагностика скрытого вируса
3.2. Формирование латентности и локализация скрытого вируса
3.3. Вертикальная передача вируса.
3.4. Скрытый вирус в популяциях насекомых
3.5. Идентификация бакуловирусных изолятов непарного шелкопряда, выделенных в различные фазы градации численности насекомого
3.6. Идентификация бакуловирусных изолятов шелкопрядамонашенки, выделенных в различные фазы градации численности насекомого.
3.7. Заключение.
Глава 4. Экспериментальное исследование индуцируемости латентной вирусной инфекции у непарного шелкопряда и шелкопрядамонашенки
4.1. Исследование возрастной чувствительности гусениц непарного шелкопряда к индуцированию бакуловирусной инфекции.
4.2. Исследование индуцируемости бакуловирусной инфекции в различные периоды вспышки массового размножения непарного
шелкопряда
4.3. Исследование индуцируемости бакуловирусной инфекции в различные периоды онтогенеза шелкопрядамонашенки.
4.4. Возможность применения активации латентной вирусной инфекции в диагностике фаз вспышки массового размножения шелкопрядамонашенки
4.5. Заключение.
Глава 5. Особенности проявления полиэдроза в очагах массового размножения непарного шелкопряда
5.1. Некоторые аспекты биологии и экологии непарного
шелкопряда
5.2. Особенности биологин и экологии непарного шелкопряда
в Западной Сибири.
5.3. Роль полиэдроза в популяционной динамике непарного шелкопряда
5.4. Персистенция ВЯП непарного шелкопряда в лесной
экосистеме
5.5. Вертикальная передача вируса через инфицирование яйцекладок непарного шелкопряда в окружающей среде
5.6. Анализ причин затухания вспышки массового размножения непарного шелкопряда 1
5.7. Заключение.
Глава 6. Влияние полиэдроза на популяционную динамику шелкопрядамонашенки
6.1. Распространение, вредоносность и биология шелкопрядамонашенки
6.2. Особенности биологии и экологии шелкопрядамонашенки, связанные с проявлением полиэдроза в очагах массового размножения.
6.3. Роль полиэдроза в затухании вспышек массового размножения шелкопрядамонашенки.
6.4. Заключение.
Глава 7. Оптимизация культивирования вирусов шелкопрядамонашенки и непарного шелкопряда и их применение в качестве агентов биологического контроля численности насекомыххозяев
7.1. Определение возрастной чувствительности гусениц шелкопрядамонашенки к ВЯП
7.2. Оценка способов культивирования ВЯП шелкопрядамонашенки
7.3. Определение возрастной чувствительности гусениц непарного шелкопряда к ВЯП и условий культивирования
вируса.
7.4. Ограничение численности непарного шелкопряда с
помощью вирусологического метода
7.5. Ограничение численности шелкопрядамонашенки
7.6. Заключение.
8. Заключение.
Выводы.
Литература

Собственно процесс заражения варьировал в зависимости от возраста гусениц. Для I и II возрастов поступали следующим образом. На поверхность питательной среды, разлитой слоем 2 мм в чашки Петри, наносили по 3 мкл суспензии с соответствующим разведением полиэдров. После высыхания суспензии стеклянной трубкой диаметр 3 мм, длина мм отбирали часть среды с нанесенной дозой вируса. В трубку подсаживали гусеницу, закрывали ватной пробкой входное отверстие и подсаживали в пенициллиновый флакон с неинфицированной средой. В случае гусениц III и IV возрастов из питательной среды вырезали кусочки корма диаметром 5 мм, высотой 4 мм и помещали в чашки Петри. На корм наносили 3 мкл полиэдров в соответствующем разведении, подсушивали и рассаживали гусениц. Для инфицирования насекомых применяли питательную среду, приготовленную без формалина. Контрольным насекомым предлагали интактный корм. В экспериментах учитывали гусениц, потребивших весь инфицированный корм. После заражения за насекомыми проводили регулярные наблюдения, добавляли корм по мере необходимости и отмечали динамику гибели. Погибших насекомых удаляли и помещали в холодильник при 2 С. Эксперименты выполняли до фазы куколки. В 1 1
где количество насекомых, зараженных определенной дозой вируса Т количество полиэдров, выделенное из погибших при заражении насекомых В выход полиэдров на 1 инфицированную особь. При активации латентной вирусной инфекции у насекомых сульфатом меди готовили 0. Обработку корма осуществляли так же, как при инфицировании насекомых. Для создания повышенной влажности воздуха в сосудах дно и стенки последних опрыскивали дистиллированной водой из пульверизатора и закрывали верх калькированной бумагой. Показателем 0ной относительной влажности воздуха служил конденсат на внутренней поверхности сосудов. Через часов насекомых пересаживали в просушенные сосуды. Больные полиэдрозом гусеницы за дня до гибели становятся малоподвижными и вялыми. У них резко падает тургор тела вместо упругого и эластичного оно становится мягким и отечным. Окраска покровов тела изменяется появляется матовый блеск и преобладание розовых тонов. Нередко у больных гусениц наблюдается выпадение волосков. Гусеницы прекращают питаться и реагировать на внешние раздражители. Погибшие ог полиэдроза гусеницы обычно прикреплены к частям растений брюшными ножками и свисают вниз головой. При разрыве покровов вытекает жидкость бурого цвета, содержащая в большом количестве вирусные включения. Описанных внешних признаков инфекции во многих случаях достаточно, чтобы установить первичный диагноз болезни и гибели насекомого. Для уточнения диагноза необходимы дальнейшие цитологические и гистологические исследования препаратов, полученных из больных и погибших насекомых. Поскольку при ядерных полиэдрозах чешуекрылых в пораженных клетках образуются включения полиэдры, различимые в световом микроскопе, в работе в качестве одного из основных методов диагностики полиэдроза использовали микроскопический анализ материала. Нативные препараты готовили следующим образом. Гусениц старших возрастов препарировали и вырезали из разных участков кусочки органов и тканей, которые помещали в каплю смеси физиологического раствора с глицерином и накрывали покровным стеклом. Края покровного стекла для обеспечения сохранности материала заливали парафином, и приготовленный таким способом препарат мог храниться в течение х месяцев. Временные нативные препараты исследовали под микроскопом. Для анализа сухого патологического материала кусочки ткани из средней части трупа насекомого растирали в небольшом количестве воды и готовили взвеси, которые исследовали в раздавленной капле или использовали для приготовления мазков и последующего окрашивания. Полиэдры не прокрашиваются обычными гистологическими красителями, поэтому для их выявления применяли предварительную обработку препаратов слабыми растворами щелочей. После воздействия 1ной щелочыо полиэдры интенсивно воспринимали гематоксилин, эозин, фуксин и другие красители. В процессе исследований нами использовались методы приготовления мазков, описанные Я.

Название работы	Автор	Дата защиты
Амфибиотические насекомые Северо-Востока Азии	Засыпкина, Ирина Анатольевна	1999
Эколого-фаунистический обзор мух-сирфид (Diptera, Syrphidae) Северо-Западного Кавказа	Кустов, Семен Юрьевич	2003
Зоогеографический анализ населения булавоусых чешуекрылых (Lepidoptera, Rhopalocera) Юго-Восточного Алтая	Бондаренко, Алексей Викторович	1999

Электронная библиотека диссертаций

Основные механизмы формирования и персистенции бакуловирусных инфекций у массовых видов лесных насекомых-фитофагов