+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Посттрансляционные модификации белков семейства GFP

  • Автор:

    Мартынов, Владимир Иванович

  • Шифр специальности:

    02.00.10

  • Научная степень:

    Докторская

  • Год защиты:

    2013

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    190 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

1. Литературный обзор
Флуоресцентные маркеры для мечения объектов в живой клетке
1.1. Низкомолекулярные синтетические флуорофоры
Реакции коньюгирования с биомолекулами
Эндогенные флуорофоры
Полициклические ароматические соединения
Кумарины
Хинолины
Индолы и имидизолы
Другие флуорофоры с возбуждением в УФ-области
Флуоресцеин
Родамин
Нафтоксантеновые метки
Фенантридины
ВОБ1РУ
Цианины
Фталоцианины
Оксазины
1.2. Квантовые точки
Синтез
Биосовместимые КТ
Эффекты, связанные с «кэппированием» КТ
Замена поверхностных лигандов
Методы «кэппирования» лигандов
Цитотоксичность
1.3. Флуоресцентные маркеры на основе белков семейства СЕР
Образование хромофора ОБР
Основные цветовые варианты флуоресцентных белков
Синие флуоресцентные белки
Циановые флуоресцентные белки
Зеленые флуоресцентные белки
Желтые флуоресцентные белки
Оранжевые флуоресцентные белки
Красные и дальне-красные флуоресцентные белки
2. Результаты и их обсуждение
2.1. Хромопротеины д1СР из Соторога (епшбепэ и с§СР из Соп<1у1асйв gigantea принадлежат к БзКеб-подсемейству ОБР-подобных белков
2.2. Красная флуоресценция белка г2РР574 из 2оаШкт ер. 2 как результат реакции окисления-декарбоксилирования Азр
2.3. Является ли желтая флуоресценция результатом необычного микроокружения хромофора, или следствием дополнительной посттрансляционной модификации п-ГБИ?
2.4. Хромофор фотоактивируемого белка asFP595 из Anemonia sulcata как производное хромофора DsRed-типа
2.5. Фотопревращение хромофора флуоресцентного белка из ОепйгоперЫкуа эр
2.6. Фотоактивируемый аналог белка асСтРРІ. из Аедиогеа coe.rulesc.ens
3. Экспериментальная часть
4. Выводы
5. Благодарности
6. Список сокращений
7. Список литературы

Последнее десятилетие характеризуется стремительным развитием молекулярной биологии с применением генноинженерной технологии введения флуоресцентных биологических зондов в живые системы [1]. В большинстве случаев в качестве таких зондов используются недавно открытые природные флуоресцирующие белки (ФБ) семейства ОБР и их мутантные варианты [2].
Большинство ФБ обладают яркой флуоресценцией, перекрывая практически весь видимый диапазон спектра [3]. Хромофор этих белков синтезируется в результате посттрансляционных автокаталитических реакций и в процессе этого синтеза не требуется практически никаких дополнительных внешних кофакторов [4, 5]. Иначе говоря, все оптические свойства различных представителей СВР семейства кодируются генетически. В совокупности, эти свойства позволяют получать гибридные белки, в состав которых входит сам ОРР-зонд и практически любой белок-мишень живой клетки [6]. Кроме того, в отличие от низкомолекулярных флуорофоров, эмиссия белков вБР семейства подвергается тонкой настройке с помощью белкового матрикса, что позволяет применять генетические манипуляции с целью оптимизации оптических свойств ФБ [7, 8]. Таким образом, фотофизические свойства флуоресцентных белков могут быть модифицированы или улучшены с помощью мутагенеза [7].
В настоящее время разрабатываются методы использования флуоресцентных зондов для мечения белков [9], клеточных компартментов, клеток и тканей, в качестве маркеров, позволяющих следить за экспрессией белков [10], их локализацией, подвижностью и взаимодействиями [11]. На основе ФБ созданы сенсоры на ионы Са2+ [12], Си2+ [13], Хт?+ [14], СГ [15], а также редокс сенсоры [16], сенсоры на Н2О2 [17, 18], сАМР [19, 20], активность клеточных киназ [21], протеиназ, каспаз [22], вТР-аз [23, 24]. В будущем, применение технологии флуоресцентных биологических зондов, несомненно, внесет огромный вклад в развитие методик, используемых в медицине для изучения

бензильного остатка от хромофорной группы. Как результат последней реакции,'был идентифицирован продукт с присоединенной молекулой кислорода по Са атому аминокислоты 66. В этой работе предполагается, что дальнейшее направление ПТМ (окисление или гомолитическое расщепление) контролируется остатком в1и-222 [350].
При изучении реакции окисления применялось также восстановление созревшего хромофора вРР (СРРбо1 варианта) дитионитом (рис. 7) [351]. После удаления восстановителя белок вновь окислялся под действием кислорода воздуха и приобретал способность флуоресцировать. Пространственная структура (разрешение 1,25 )
обработанного дитионитом вРР, полученная в анаэробных условиях, показала, что восстановленный хромофор сохраняет дегидратированную циклическую структуру имидазолона, но теряет копланарную конфигурацию. Полученная структура отчетливо указывает на .^-гибридизацию С(3 атома Тут-66 в результате восстановления Са-С[3 двойной связи тирозина. Однако Са атом имеет ^-гибридизацию, о чем свидетельствует планарная структура имидазолонового цикла. Все полученные структурные данные предполагают участие циклического енолята (рис. 7, структура IV) в качестве исходного продукта при окислении хромофора [351]. Предполагается, что эта структура стабилизируется положительно заряженной гуанидиновой группой Аг§-96, расположенной на расстоянии водородной связи от енольного кислорода. Карбоксильная группа С1и-222 в качестве сопряженного основания вероятно, также, принимает участие в образовании циклического енолята, поляризуя молекулу НгО в непосредственной близости от Са-углерода Туг-66 и, таким образом, облегчая депротонирование Са-углерода [16].
Основные цветовые варианты флуоресцентных белков, к
настоящему времени получено большое количество вариантов флуоресцентных белков [31, 39, 62, 328, 352-354], перекрывающих практически весь спектр видимого света. Эти варианты были получены двумя способами: во-первых, с помощью клонирования генов

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.136, запросов: 962