Иммуномониторинг при экспериментальном бруцеллезе крупного рогатого скота и лабораторных мышей

• Автор: Пацула, Юрий Иванович
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Омск
• Количество страниц: 123 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Ключевые элементы иммунной системы
Иммунитет при бруцеллезе
Современные средства воздействия на иммунную систему
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы и методы исследований
3.2. Результаты исследований
Оптимальные способы выделения лимфоцитов
Биотехнология получения реагентов для идентификации
Т- и В- лимфоцитов. Определение Т- и В- лимфоцитов
Оценка функциональной активности- лейкоцитов СППН,
ртмл, ртал)
Т- и В- лимфоциты у крупного рогатого скота
различного возраста
Динамика Т- и В- лимфоцитов у телят после иммунизации
Вг. abortus 104М
Динамика Т- и В- лимфоцитов у крупного рогатого скота
после заражения Br.abortus
Динамика функциональной активности лейкоцитов после
введения вакцинных и вирулентных бруцелл
Динамика иммунологических показателей у мышей после введения вакцины Br. abortus 19 и тимарина
3.3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. ВВЕДЕНИЕ
Иммунологию в настоящее время рассматривают как науку о механизмам сохранения биологической индивидуальности с помощью иммунной системы. Назначение которой состоит в защите организма от биологической агрессии - внешней С инфекции } и внутренней С опухоли ) [67].
С развитием современной иммунологией учения о гуморальном и клеточном иммунитете сложилось представление о системе иммуногенеза как о комплексе взаимодействующих элементов лимфоидной системы и системы поли- и мононуклеарных фагоцитов. Это представление базируется на изучении лимфоцитов, моноцитов нейтрофилов и гуморальных факторов составляющих эти системы.
Закономерности Формирования иммунитета у животных при бруцеллезе и других заболеваниях, возбудителями которых являются внутриклеточные микроорганизмы изучены недостаточно. При этом недостаточно разработаны методы идентификации иммунокомпетен-тных клеток и их функциональной активности у животных, биотехнология получения реагентов для этих иммунологических методов.
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ
В последние годы возрастает значение иммунологии как общебиологической науки. С установлением ведущей роли клеточных и гуморальных факторов в системе поддержания постоянства внутренней среды организма и защиты его от антигенного воздействия получили развитие исследования Т- и В-лимфоцитов иммунной системы у человека, лабораторных и сельскохозяйственных животных. Разра-

ботаны методы идентификации Т- и В-лимфоцитов у крупного рогатого скота и овец с помощью розеткообразования. При этом мало исследований посвящено изучению этих факторов у крупного рогатого скота в норме и при бруцеллезе [23,24,30,45,65,1861.
Важным является исследование нормального уровня факторов иммунитета, знание функционирования иммунной системы с возрастом, после антигенного и лекарственного воздействия, направленного на иммунную систему. Для проведения таких исследований необходима: разработка биотехнологии получения реагентов для идентификации клеток иммунной системы, разработка комплекса тестов отражащих количественные и функциональные изменения в различных звеньях иммунной системы, для контроля за Формированием иммунного ответа в динамике.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ
ЦЕЛЬ РАБОТЫ - изучить особенности развития иммунного ответа у крупного рогатого скота и мышей при экспериментальном бруцеллезе и влияние тимарина на формирование иммунитета у мышей.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
1. Разработать биотехнологию получения реагентов для идентификации Т- и В- лимфоцитов у крупного рогатого скота и мышей.
2. Разработать унифицированные, приемлемые для использования в ветеринарии, методы идентификации и определения функциональной активности иммунокомпетентных клеток :
оптимальные методы выделения мононуоеаров метод специфического бруцеллезного антигенного повреждения нейтрофилов
- метод специфического бруцеллезного антигенного торможе-

фракционирования).
Специфические антитимоцитарные и анти-Т-лимфоцитарные сыворотки после абсорбции не оказывали цитотоксического действия на В-лимФоциты и вызывали гибель 92-96% тимоцитов. Антисыворотки к Т-лимфоцитам были наиболее активны в разведении 1:5-1:7.
Сыворотки, запаянные в ампулы небольшими порциями, хранили

при температуре -20 С в течение 3-4 месяцев, используя по мере необходимости в цитотоксическом тесте.
таким образом центрифугированием в градиенте плотности 17%-ного водного раствора верографина нами были получена обогащенная Т- лимфоцитами суспензия клеток, которую использовали для получения анти-Т-лимфоцитарной сыворотки, а также ЕАС-розеткооб-разуший комплекс обогащенный эритроцитами, В- лимфоцитами и нейтрофилами, который использовали для абсорбции антитимоцитар-ных и анти-Т-лимфоцитарных сывороток.
Приготовление гемолитической сыворотки
Антиэритроцитарную сыворотку получали на 15-й день после восьми внутривенных инъекций 10%-ой суспензии свежих эритроцитов крупного рогатого скота на стерильном физиологическом растворе. Эритроциты вводили через 2 дня из расчета 1 мл эритроци-тарной суспензии на 1 кг веса кролика. Полученную сыворотку от

иммунизированных кроликов инактивировали при 56 с в течение 30 мин, готовили двухкратные разведения и ставили реакцию прямой агглютинации с 5%-ной суспензией эритроцитов крупного рогатого скота. Определяли субагглютинирущий титр С 1:100 -1:200). Затем сыворотку разливали в микроконтейнеры и замораживали.