Парвовирус B19 у доноров крови и больных гематологического стационара

• Автор: Элижбаева, Медина Абубакаровна
• Шифр специальности: 14.01.21
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 104 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Доноры
2.2. Больные
2.3. Выделение вирусных нуклеиновых кислот из сыворотки крови
2.4. Выделение геномной ДНК из лейкоцитов донорской крови
2.5. Выбор праймеров для ПЦР в реальном времени
2.6. Создание внутреннего стандарта для количественного определения ДНК PVB 19
2.6.1. Клонирование фрагмента ДНК PV В19 в вектор pGEM-TEasy
2.6.2. Построение калибровочной кривой
2.7. ПЦР в реальном времени для определения PV В
2.8. Верификация созданной тест-сисиемы для количественного выявления ДНК PV В
2.9. Мультиплексная ПЦР в реальном времени для выявления HBV и HCV
2.9.1. Обратная транскрипция РНК HCV
2.9.2. Параметры проведения мультиплексной ПЦР
2.10. Выявление антител к вирусам
2.10.1. Выявление IgM (IgG) - антител к парвовирусу В
2.10.2. Выявление HbsAg
2.10.3. Выявление антител к вирусу гепатита С
2.11. Выявление KIR - генов у доноров
2.12. Статистическая обработка результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Разработка тест-системы для определения ДНК РV В
3.1.1.1-ый этап
3.1.2. П-ой этап
3.1.3. Ill-ий этап
3.2. Выявление ДНК РV В19 у доноров
3.2.1. Создание коллекции образцов сывороток и ДНК доноров
3.2.2. Создание базы данных доноров, а также стационарных и амбулаторных больных, исследованных на наличие ДНК PV В
3.2.3. Выявление ДНК PV В19 у доноров с помощью количественной тест-системы
3.2.3.1. Доноры ОПКГНЦ
3.2.3.2. Доноры Чеченской республиканской СПК
3.3. Выявление антител классов IgM и IgG у доноров положительных на ДНК PV В19
3.3.1. Доноры ОПК ГНЦ
3.3.2. Доноры Чеченской республиканской СПК
3.4. Связь вирусной нагрузки с антителами, вырабатываемыми на PV В
3.5. Тестирование доноров Чеченской республиканской СПК с помощью мультиплексной системы для комплексного тестирования гепатитов В и С и парвовируса В
3.6. Исследование вариабельности KIR - генов в двух популяциях доноров
3.7. Результаты анкетирования доноров
3.7.1. Доноры Чеченской республиканской СПК
3.7.2. Доноры ОПК ГНЦ
3.8 Выявление ДНК PV В19 у стационарных и амбулаторных больных гематологического центра
Глава 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
Приложение
Приложение

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Анти-НСV - антитела к вирусу гепатита С
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ИТП - идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура
КМ - костный мозг
нм - нанометр
нт - нуклеотид
ОЛ - острый лейкоз
ОЛЛ - острый лимфолейкоз
ОПК - отделение переливания крови
п.н. - пара нуклеотидов
ПДЭ - преходящая детская эритробластопения ПЦР - полимеразная цепная реакция РНК - рибонуклеиновая кислота СПК - станция переливания крови
СэС1 - хлористый цезий
сШТР - дезоксинуклеозидтрифосфат
HbsAg - поверхностный антиген вируса гепатита В
НВУ -вирус гепатита В
НСУ - вирус гепатита С
- иммуноглобулины класса О
- иммуноглобулины класса М РУ В19 - парвовирус В
БИБ - додецилсульфат натрия УЬР - вирусоподобная частица

признаки парвовирусной инфекции включают в себя утомляемость и бледность, тогда как иммуно-обусловленные признаки (сыпь и артралгия), как правило, отсутствуют [14-13]. В ряде случаев такие симптомы PV В19 инфекции могут предшествовать проявлению симптомов основного заболевания [257]. Анемия может быстро регрессировать после применения иммуноглобулина или антивирусной терапии (у ВИЧ пациентов) [258-261]. В случаях, когда иммунодефицит вызван химиотерапией, отмена или перерыв в терапии также ведет к ремиссии анемии [262].
1.11.2.2. СПИД
Одно из первых исследований, в которое были включены 50 пациентов с диагнозом СПИД, не обнаружило ни у кого из них виремии PV В19. Однако распространенность вызванной PV В19 анемии среди сероположительных ВИЧ пациентов может быть недооценена [263]. Тот факт, что ДНК PV В19 была обнаружена путем дот-блот гибридизации в сыворотке 5 из 30 (17%) ВИЧ-инфицированных пациентов с гематокритом < 24 и у 4 из 13 (31%) пациентов с гематокритом < 20, дает основание предположить, что PV В19 является довольно распространенной причиной анемии при ВИЧ-инфекции [258].
1.11.2.3. Острый лимфолейкоз
Хроническая инфекция PV В19 фигурирует в описаниях случаев заболевания острого лимфолейкоза (ОЛЛ) у взрослых [264-270], и детей [14-18, 257, 271-279]. Во всех описанных случаях пациенты с PV В19 страдали хронической анемией, но у них отсутствовали сыпь и артропатия. Детский лимфобластный лейкоз наиболее часто развивается именно в том возрасте, когда пациенты впервые сталкиваются с PV В19 и поэтому могут быть особенно подвержены пагубным последствиям инфекции. Согласно исследованию, у 8% PV В19-серонегативных пациентов с острым лимфоидным лейкозом сероконверсия произошла во время поддерживающей химиотерапии, и эти случаи совпадали