Применение иммуноферментного анализа для выявления острой и хронической интоксикации метадоном

• Автор: Дмитриева, Ирина Геннадьевна
• Шифр специальности: 14.00.45
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 138 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение
Глава! Обзор литературы
1.1. Влияние антител к препаратам на их фармакологическое действие
1.2. Неспецифический иммунный ответ на введение опиатов
1.2.1. Реакция иммунокомпетентных клеток на введение опиатов
1.2.2. Неспецифическое влияние опиатов на гуморальный ответ
1.3. Специфическое антителообразование к опиатам
1.3.1. Специфический гуморальный ответ на стимуляцию метадоном
1.4. Методы лабораторной диагностики, исполь-
зуемые для анализа опиатов в биологических средах
1.4.1. Физико-химические методы анализа
1.4.2. Иммунохимические методы анализа
Глава 2 Материалы и методы исследования
Глава 3 Разработка твердофазного иммунофермент-
ного анализа для определения содержания метадона в биологических жидкостях
3.1. Сравнение двух схем анализа для выявления
морфина

3.2. Разработка твердофазного ИФА для опреде-

ления содержания метадона в моче
3.3. Получение высокоавидных кроличьих иммунных антисывороток к метадону
3.4. Разработка твердофазного иммунофермент-ного анализа для определения содержания метадона в сыворотке (плазме) крови
Глава 4 Исследование феномена индукции антител к
метадону при поддерживающей терапии
4.1. Разработка методик выявления антител к метадону
4.2. Изучение классового состава и специфичности антител к метадону и морфину
4.3. Исследование особенностей анамнеза больных, синтезирующих антитела к метадону
4.4. Анализ факторов, способствующих возникновению антител к наркотическим препаратам
(на примере морфина)
Глава 5 Обсуждение результатов
Выводы
Список использованной литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1ёА - иммуноглобулин класса А
їв о - иммуноглобулин класса О
івм - иммуноглобулин класса М
АтМ - антитела к морфину
АтМет - антитела к метадону
БСА - бычий сывороточный альбумин
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ГЖХ - газожидкостная хроматография
гзт - гиперчувствительность замедленного типа
ДМФА - диметилформамид
дцк - дициклогексилкарбодиимид
ЕКК - естественные клетки-киллеры
ЗФР - забуференный фосфатами физиологический раствор
ИФА - иммуноферментный анализ
ИФН - интерферон
Ка - константа аффинности
КВ - коэффициент вариации
КЖ - культуральная жидкость
КММ - карбоксиметилморфин
Кон А - конканавалин А
Мон Ат - моноклональные антитела
ОП - оптическая плотность
ОФД - ортофенилендиамин
ИХ - пероксидаза хрена
РИА - радиоиммуный анализ
РОК - розеткообразующие клетки
РПК - реакция поглощения комплемента
ТНБС - тринитробензолсульфокислота
тех - тонкослойная хроматография
УФ - ультрафиолетовый
ФГА - фитогемагглютинин
ФИО - фактор некроза опухоли
ц-АМФ - циклический аденозин-монофосфат
ЧСА - человеческий сывороточный альбумин
ЭБ - эритроциты барана

растворе, конкурентно ингибировать связывание меченного радиоактивным изотопом препарата со специфическими антителами против данного препарата. По чувствительности РИА равен известным хроматографическим и спектрофотометрическим методам или превосходит их и сопоставим с твердофазным ИФА (Hill, 1986). Последний, однако, имеет ряд преимуществ: большую стабильность ферментных реагентов и более простое и доступное оборудование, не требующее специального оснащения лаборатории.
Наиболее чувствительным и удобным среди иммунологических методов количественного определения наркотических и других одурманивающих веществ в биологических жидкостях является им-мунофлюоресцентный анализ (Фрайфелдер,1980). Фирмой "ABBOT" (США) разработана система TDX, основанная на сочетании иммунологического анализа с поляризацией флюоресценции. Этот метод объединяет конкурентное связывание реагентов с прямой регистрацией поляризации флюоресценции без процедуры разделения компонентов реакции. В системе TDX меткой на препарате служит флуоресцентный краситель - флуоресцеин. Иммунофлуоресцентная система анализа имеет ряд преимуществ перед иммуноферментны-ми: большую точность и меньшую подверженность влиянию температуры и pH среды, характерную для фермент-субстратных отношений, а также исключительную быстроту и простоту проведения анализа. Реагенты с флуоресцентной меткой стабильнее во времени, чем с ферментной. Проведение анализа, однако, требует дорогостоящих реагентов и аппаратуры.
Поскольку проблема определения метадона очень актуальна, одновременно с нами над созданием методики его определения работали также Kell et Techman. В конце 1996 г. была опубликована их