Влияние гепарина на структурно-функциональные свойства иммуноглобулина G

• Автор: Родникова, Анна Аркадьевна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 95 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Взаимодействие иммуноглобулинов с различными биомолекулами
1. Иммуноглобулины в активации системы комплемента
2. Влияние гликозилирования первичной последовательности иммуноглобулинов на эффекторные функции молекул
3. Взаимодействие с лектинами
4. Влияние агрегации иммуноглобулинов на их эффекторные функции
5. Комплексы иммуноглобулинов с заряженными биополимерами:
значение в регуляции гуморального иммунитета
Глава 2. Строение и свойства гепарина
1. Синтез, секреция и распределение гепарина в тканях и циркуляции в норме и
при различных патологических состояниях
2. Биологические функции гепарина
II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
III. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 1. Взаимодействие 1§0 с гепарином
1. Выполнение эксперимента по взаимодействию 1£(л с гепарином
2. Антикоагулянтные свойства гепарина, образующего комплекс с
3. Спектрофотометрический анализ комплекса гепарина с
4. Влияние до и после обработки гепарином на реакцию агглютинации эритроцитов
Глава 2. Взаимодействие низкомолекулярной фракции гепарина (НМФГ) с 1§0
1. Выполнение эксперимента
2. Спектрофотометрический анализ полученных препаратов
3. Изучение антикоагулянтной активности соединения с НМФГ
4. Изучение влияния на реакцию агглютинации эритроцитов соединения
НМФГ
5. Взаимодействие НМФГ с пептидами района талии молекулы 1§0
6. Взаимодействие с восстановленными Б-Б связями с НМФГ
Глава 3. (Приложение)
Структурно-функциональные свойства коммерческого препарата гепарина
1. Связь структуры молекулы гепарина с его антикоагулянтной и антиоксидантной активностью
2. Взаимосвязь антиоксидантных свойств гепарина и его антикоагулянтной
активности при введении in vivo
IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ВВЕДЕНИЕ
Иммуноглобулины и основной класс этих белков - IgG играют ключевую роль в защите организма от генетически чужеродных молекул и микроорганизмов. Защитная роль IgG сочетается, ввиду многообразия эффекторных функций этого белка, с участием в многочисленных патофизиологических реакциях, способных оказать существенное влияние на жизнедеятельность отдельных систем организма и всего организма в целом. Эффекторные функции IgG реализуются при изменении конформации молекулы этого белка и сопутствующего процесса его агрегации (24, 33, 34). Следовательно, изменение агрегатного состояния IgG служит основной причиной возникновения патофизиологических реакций с участием IgG.
Изменения агрегатного состояния IgG могут происходить в результате взаимодействия IgG антител с антигенами или без участия последних, в частности, в результате изменения электрического заряда молекулы IgG вследствие комплексообразования с полиэлектролитами (22, 24, 33, 57). Источником последних in vivo служат разнообразные сульфатированные и сиалированные гликопротеины и продукты их расщепления (протео- и пептидогликаны).
Важнейшим представителем семейства пептидогликанов служит гепарин. Концентрация таких полиэлектролитов, как гепарин, способна существенно изменяться в короткое время (минуты, часы) при различных патофизиологических реакциях, за счет его высвобождения из гранул тучных и эндотелиальных клеток (5, 15).
Содержание IgG в циркуляции также претерпевает изменения, например, при инфекционных и других заболеваниях, однако за более продолжительные сроки, чем увеличение уровня гепарина и других пептидогликанов (24, 34). Ввиду возможности взаимодействия IgG с гепарином, непосредственно в циркуляции следует ожидать существенных изменений кинетики их взаимодействия, обусловленных быстрыми изменениями концентрации гепарина при острых нарушениях гомеостаза, например, при травмах, ожогах и др.. Последствиями таких сдвигов в концентрации гепарина в системе IgG - гепарин могут быть быстро возникающие изменения агрегатного состояния IgG и, как результат этого, возникновение разнообразных патофизиологических реакций.
Взаимодействие IgG с гепарином не было исследовано до настоящего времени. Между тем представляется очевидной теоретическая значимость этой проблемы для
1. Выполнение эксперимента по взаимодействию IgG с гепарином
Эксперимент выполняли следующим образом: к коммерческому препарату IgG "Serva" (м. м. 150000) после осветления (см. раздел "Материалы и методы") в концентрации 3,5 мг/мл, добавили коммерческий препарат гепарина ("Spofa" 100000 Е) в концентрации 25 мкг/мл и, после выдерживания смеси при комнатной температуре в течение 1 часа, переносили ее на фильтр "Центрифло" CF-25 с целью отделения с помощью фильтрации избытка несвязанного гепарина от IgG. Фильтрацию осуществляли согласно прописи изготовителя фильтров с помощью центрифугирования при 2300 об/мин на центрифуге К-23 с охлаждением. Исходный объем фильтруемой жидкости составлял 7 мл, конечный - 0,5 мл. Затем, оставшийся в конусе воронки материал разводили физиологическим раствором до исходного объема и вновь фильтровали центрифугированием на CF-25 для удаления следов свободного гепарина. Эту процедуру повторяли дважды. Затем, находящийся в конусе воронки IgG разводили физиологическим раствором до исходного объема и собирали. Эксперимент повторяли пять раз.