Разработка новых подходов к оценке функциональной активности иммуноглобулина G сыворотки крови человека

• Автор: Климова, Светлана Валентиновна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 112 с.

Список принятых сокращений
АГ - антиген АК - аминокислота АТ - антитело
БСА - бычий сывороточный альбумин ВИЧ - вирус иммунодефицита человека
ГМГМ - тетрасахарид, состоящий из N-ацетилглюкозамина ацетилмурамовой кислоты
ГМДП - N-ацетилглюкозамин - N-ацетилмурамил - L-аланил изоглютамин
ИА - индекс аффинности ИФА - иммуноферментный анализ КГ - коэффициент гликозизирования НБ - неврологические больные ОА - относительная аффинность
• ' ** г**'./*
ОП - оптическая плотность ttStt'j
ОПАТ -остаточный процент антител
ОПРНП - острая полирадикулоневропатия Гийена-Барре
ОСМ - опухоль спинного мозга
ОФД - ортофенилендиамин
ПГ - пептидогликан Staphylococcus aureus
ПД - после десиалирования
PC - рассеянный склероз
СК - секреторный компонент
СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита
ФСБ - фосфатно-солевой буфер
ЦСЖ -цереброспинальная жидкость
ЦФБ - цитратно-фосфатный буфер
ЧДБ - часто и длительно болеющие
ЧРВИ - частые респираторно-вирусные инфекции
ЧТиБ - частые трахеиты и бронхиты
ВС - антиген Branchamella catarrhalis
BS2 - лектин Bandeiraea simplicifolia
С - константный участок молекулы иммуноглобулина
СопА - лектин Canavalia ensiformis
ЕС - лектин Erythrina cristagalli
FcR -Fc-рецептор
Gal - галактоза
GlcNAc - N- ацетилглюкозамин
H - тяжелая цепь молекулы иммуноглобулина
Ш - антиген Haemophilus influenza
Ка, - константа ассоциации
Kd, - константа диссоциации
k0ff - кинетическая константа распада комплекса
коп, - кинетическая константа образования комплекса
L - легкая цепь молекулы иммуноглобулина
Man - манноза
PhA - лектин Phytolacca americana Pn - белковый антиген Streptococcus pneumoniae RHAV - Relative High Affinity Value RU - единицы ответа (responce units)
SPR - поверхностный плазмон-резонанс (surface plasmon resonance) V - вариабельный участок молекулы иммуноглобулина
Оглавление
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Физико-химические свойства иммуноглобулинов человека
1.1.1. Характеристика строения и особенностей основных
классов иммуноглобулинов
1.1.2. Антигеннезависимые функции иммуноглобулинов
1.1.3. Антигензависимые функции иммуноглобулинов
1.1.4. Свойства продуктов частичного протеолиза иммуноглобулинов
1.2. Некоторые методы оценки аффинности антител
1.2.1. Определение констант равновесия
1.2.2. Методы определения динамических констант
1.2.3. Методы оценки относительной аффинности антител
1.3. Гликозилирование антител
1.3.1. Общие представления о гликопротеинах животного происхождения
1.3.2. Расположение и функции углеводного компонента в
составе иммуноглобулинов
1.3.3. Строение олигосахаридного фрагмента IgG человека
1.3.4. Биосинтез N-гликанов
1.3.5. Влияние уровня гликозилирования иммуноглобулинов на их биологические функции
1.3.6. Лектины как детекторы углеводного компонента гликопротеинов. 40 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Характеристика обследованных групп населения
2.2. Реактивы и расходные материалы
2.3. Оборудование
2.4. Получение антигенных препаратов
2.5. Определение основных показателей гуморального иммунитета
2.5.1. Определение иммуноглобулинов G, А, М сыворотки крови
2.5.2. Определение субклассов иммуноглобулина G

полностью гликозилированного полипептида. Углеводные группы всегда находятся на поверхности белковой глобулы, чаще всего в участках с (3-складчатой структурой [82].
После переноса на полипептидную цепь олигосахариды подвергаются интенсивной модификации. Серию модифицирующих реакций называют процессингом. Высокоспецифические ферменты (а-глюкозидаза, а-маннозидаза) частично дегликозилируют олигосахарид. Может также наблюдаться ресинтез гликанов с высоким содержанием маннозных остатков. В итоге образуется углеводная структура, состоящая из хитобиозы (01сКАср1401сУАс) и маннозы. Затем в результате реакции терминирования с участием 14-ацетилглюкозаминилтрансфераз I и II, галактозилтрансферазы, фукозилтрансферазы и различных сиалилтрансфераз происходит превращение олигоманнозидных Х-гликанов в сложные цепи, входящие в окончательный состав гликопротеинов [54, 72, 114, 116].
Даже в пределах одного клона плазмоцитов, продуцировавших 1§М, наблюдали гетерогенность по характеру гликозилирования определенного аспарагинового участка, причем клетки продуцировали 1§М с углеводными цепями двух основных типов: а) содержащие только маннозу и 14-
ацетилглюкозамин; б) содержащие, кроме того, галактозу, фукозу и сиаловую кислоту, то есть подвергшиеся прцессингу и реакции терминирования [73]. Хотя эта гетерогенность и может быть следствием опухолевой трансформации миеломных клеток, вероятнее всего она отражает естественный механизм биосинтеза М-гликанов. В пользу этого свидетельствует аналогичная гетерогенность углеводного компонента яичного альбумина, который является продуктом синтеза одной нормальной клетки.
Методом радиоавтографии было установлено, что присоединение 14-ацетилглюкозамина и маннозы к полипептиду происходит в шероховатом эндоплазматическом регикулуме (ЭПР), а присоединение галактозы, фукозы и Т4-ацетилгалактозамина - в гладком ЭПР, особенно в мембранах аппарата Гольджи. Метаболический контроль биосинтеза регулируется внутриклеточной концентрацией долихола и долихолфосфата [31].