Моноклональные антитела в диагностике инфекций, вызванных микобактериями

• Автор: Черноусова, Лариса Николаевна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 199 с. : ил.

Содержание
Список сокращений
Введение
Часть I. Обзор литературы
Глава I. Иммунный ответ на микобактерии и его эндогенная
регуляция
1.1. Субпопуляции клеток-помощников (Тх)
1.2. Эффекторные функции продуктов Тх1 и Тх2
1.3. Роль цитокинов в развитии заболеваний, вызванных микобактериями
1.4. Специфические механизмы иммунитета к микобактериям
1.5. Клиническое значение динамики антителообразования к определенным антигенным детерминантам микобактерий
Г лава 2. Серодиагностика туберкулеза и других микобактериозов
2.1. Иммуноферментный анализ в диагностике туберкулеза
2.2. Механизм развития ложноотрицательных и ложноположительных антительных реакций
Глава 3. Анализ экспрессии эпитопов, выявляемых МкАТ на антигенах микобактерий
Часть II Собственные исследования
Глава 4. Материалы и методы
Глава 5. Получение и характеристика моноклональных антител (МкАТ)
5.1. Получение МкАТ к Mycobacterium tuberculosis complex
5.2. Получение МкАТ к Mycobacterium bovis
5.3. Получение МкАТ к Mycobacterium avium
5.4. Получение МкАТ к атипичным микобактериям
5.4.1. Оптимизация первичного скрининга гибридом, продуцирующих антитела к атипичным микобактериям
5.4.2. Получение МкАТ к Mycobacterium kansasii и Mycobacterium smegmatis
5.5. Характеристика панели МкАТ к антигенам микобактерий

Глава 6. Использование МкАТ для определения антител и антигенов при диагностике заболеваний, вызываемых микобактериями
6.1. Определение антител в сыворотках больных туберкулезом легких к аффинноочищенным на МкАТ антигенам
6.2. Эффективность использования конкурентного ИФА с МкАТ 1D3
для серодиагностики M.avium - инфекции у людей
6.3. Определение антигенов микобактерий туберкулеза в спинномозговой и плевральной жидкостях больных туберкулезом
методом ингибиции с МкАТ 10D6
6.4. Обнаружение антигенов микобактерии в культуральной среде методом «двойного антительного сэндвича» с МкАТ 10D6
Глава 7. Видовая идентификация микобактерий методом Western blot с моноклональными антителами
Глава 8. Изучение особенностей антигенной структуры микобактерий туберкулезного комплекса методом Western blot с моноклональными антителами
Часть III. Обсуждение результатов
Глава 9. Повышение эффективности серодиагностики микобактериозов с помощью моноклональных антител
Глава 10. Эпитопное картирование микобактериальных антигенов - новый подход в идентификации микобактерий
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы

Список сокращений
АГ антиген
АТ антитело
БСА бычий сывороточный альбумин
ГАТ гипоксантин, аминоптерин, тимидин
ГЗТ гиперчувствительность замедленного типа
ГКГ главный комплекс гистосовместимости
ГМ-КСФ грануло-макрофагальный колониестимулирующий фактор
ГТ гипоксантин, тимидин
ДАТ диацилглицерол
дмсо диметилсульфоксид
ден додецилсульфат натрия
иг иммуноглобулин
ил интерлейкин
ИНФ интерферон
ИФА иммуноферментный анализ
ЛА латекс-агглютинация
ЛАМ липоарабиноманнан
МАГ микобактериальный антиген
МкАТ моноклональные антитела
НАФ неполный адъювант Фрейнда
Г1ААГ полиакриламидный гель
ПХ пероксидаза хрена
РПГА реакция пассивной гемагглютинации
РРБ очищенный белковый дериват микобактерий
СВ кластер дифференцировки
Тгзт Т-эффекторы гиперчувствительности замедленного типа
ТЕМЕД 1,2-бисдиметиламиноэтан
ТРФ фактор роста тромбоцитов
Тх субпопуляция лимфоидных Т-клеток хелперов
ТХУ трихлоруксусная кислота
ФН фибронектин
ФНО фактор некроза опухоли
ЭДТА этилендинитротетрауксусная кислота

В последние годы накопились данные, позволяющие проанализировать факторы, влияющие на результаты при определении антител к одному антигену.
Антигенный комплекс термостабильных макромолекулярных антигенов -А60, был выделен с помощью проточной хроматографии из цитоплазмы M.bovis BCG (107, 108, 109, 110, 197). Он активировал как Т-клеточный ответ, так и антителообразование, и представлял собой смесь АГ, важнейшими из которых являлись АГ молекулярной массой 52, 28, 25, 14 кДа (38).
Первые опыты с данным антигеном показали его уникальную диагностическую ценность, в частности, серодиагностические тесты с А60 обладали 100% чувствительностью и 93,7% специфичностью. Это послужило основанием для широкой апробации данного антигена в диагностике туберкулеза легких. По существу, был поставлен уникальный эксперимент, в котором с помощью стандартного антигена решались различные аспекты серодиагностики туберкулеза легких, вызванного M.tuberculosis, и исследовались особенности антителообразования в различных группах больных (146, 173, 184, 260,350,404).
Прежде всего, полученные данные убедительно показали, что динамика ИГМ, ИГГ ответа к определенным антигенам отражает динамику инфекционного процесса и даже выздоровление в результате специфического лечения. Анализ продукции антител у больных при использовании в качестве антигена А60 показал, что у здоровых и вакцинированных лиц был очень низкий уровень антител против указанных выше его доминантных компонентов (238). У больных туберкулезом наличие ИГМ антител указывало на раннюю стадию заболевания. В более поздние сроки определялись как ИГМ, так и ИГГ антитела к компонентам молекулярной массой 52 и 28 к Да. Антитела к АГ молекулярной массой 25 и 14 к Да появлялись только на 6-ом месяце заболевания. В результате лечения у больных переставали обнаруживаться