Урогенитальные инфекции у женщин с осложненным акушерско-гинекологическим анамнезом и риск инфицирования плода и новорожденного

• Автор: Бурменская, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 14.00.30
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 125 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ.
Список сокращений и обозначений
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. Клинико-эпидемиологические аспекты урогенитальных инфекций и методы их диагностики (обзор литературы)
1.1. Клинико-эпидемиологическая и биологическая характеристика возбудителей урогенитальных инфекций: ВПГ-2, ЦМВ, Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, M. hominis
1.2. Влияние урогенитальных инфекций на течение беременности, развитие плода и новорожденного
1.3. Методы диагностики урогенитальных инфекций
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы и реактивы
2.2. Характеристика клинического материала
2.3. Методы выделения ДНК
2.4. Методы лабораторной диагностики инфекций
2.4.1. Метод полимеразной цепной реакции
2.4.2. Диагностика хламидий методом НИФ
2.4.3. Выявление иммуноглобулинов класса G к C.trachomatis методом
тИФА
2.4.4. Выявление хламидийной протеазы
2.4.5. Выявление иммуноглобулинов классов М и G к ВПГ и ЦМВ методом
тИФА
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Оптимизация условий проведения ДНК-амплификационного метода диагностики возбудителей УГИ
1.1. Подбор праймеров
1.2. Подбор оптимальных условий проведения ПЦР
1.3. Подбор оптимальных условий выделения ДНК
1.4. Учет чувствительности, специфичности и воспроизводимости метода
1.5. Сравнение эффективности разных методов лабораторной диагностики возбудителей УГИ
2. Широта распространения хламидийной, микоплазменных и герпесвирусных инфекций среди женщин с осложненным акушерским анамнезом и гинекологическими заболеваниями
3. Диагностика возбудителей УГИ у новорожденных детей с нарушениями развития инфекционного генеза. Риск передачи УГИ от матери новорожденному
4. Исследование возможности внутриутробного инфицирования плода возбуди-
телями УГИ во втором триместре беременности
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ.
Hela, Vero, McCoy, L-929, BHK-21, ФЭЧ, ПЭЧ - клеточные культуры АГ - антиген АТ - антитело
ВПГ -вирус простого герпеса
ЗППП - заболевания, передаваемые половым путем
ИФ - иммуно флуоресценция
ИФА - иммуноферментный анализ
КОЕ -колониеобразующая единица
ЛИФА - лантанидный иммуноферментный анализ
ЛПС - липополисахарид
ЛЦР - лигазная цепная реакция
МКА - моноклональные антитела
НИФ - непрямая иммунофлуоресценция
ПИФ - прямая иммунофлуоресценция
ПЦР - полимеразная цепная реакция
PH - реакция нейтрализации
РИГА - реакция непрямой гемагглютинации
РСК - реакция связывания комплемента
РТ - ретикулярное тельце хламидий
тИФА - твердофазный иммуноферментный анализ
УГИ - урогенитальные инфекции
УГТ - урогенитальный тракт
УГХ - урогенитальный хламидиоз
ФИТЦ - флуоресцеинизотиоционат
ЦМВ - цитомегаловирус
ЦНС - центральная нервная система
ЦПД - цитопатическое действие
ЭТ - элементарное тельце хламидий

результата выше при первичной инфекции, чем рецидивирующей, что, вероятно связано с зависимостью длительности секреции вируса от формы герпетической инфекции.
Диагностика IIMB. В качестве культуры, главным образом, используются диплоидные человеческие фибробласты, в которых эффективно реплицируется вирус ци-томегалии. В отличие от ВПГ особенностями цитопатогенного действия ЦМВ является медленное его развитие (от 7 до 30 дней) (18). Использование специфических моноклональных антител (МКА), позволило определять возбудитель до проявления ЦПД в реакциях иммунофлуоресценции или пероксидазного окрашивания уже через 16-72 часа после инфицирования культуры (182, 210). Однако применение МКА делает и без того дорогостоящий и трудоемкий анализ еще более дорогим.
Диагностика хламидий. Анализируемый материал высевается в желточный мешок развивающегося куриного эмбриона или пересеваемые клеточные культуры: McCoy, ВНК-21, L-929, HeLa и др. (30). После инкубации в течение 2-3 суток культура обогащается специфическими внутриклеточными включениями, для выявления которых используются или обычные цитологические красители, или конъюгаты антихла-мидийных иммуноглобулинов с флуоресцеином (212). Чувствительность метода в первом пассаже составляет только 70-80 %, дополнительное пассирование повышает чувствительность на 10-20%, но затягивает получание результата на месяц и более (197).
Диагностика микоплазм. В отличии от вирусов и хламидий микоплазмы способны размножаться на бесклеточных жидкой или твердой питательных средах. Колонии микоплазм могут быть обнаружены при просмотре под микроскопом, а так же могут быть применены иммунофлуоресцентные метки и фазовоконтрастная микроскопия. Для М.hominis характерны "крупные колонии" размером 200-300 мкм, для U.urealyticum - 20-30 мкм. При росте в жидкой питательной среде U.urealyticum и М.hominis расщепляют соответственно мочевину и аргинин с образованием аммиака, который переводит кислую среду в щелочную и изменяют цвет индикатора. Используют различные по составу питательные среды и разные индикаторы.
Таким образом, культуральный метод исследования является единственным методом, позволяющим выявить наличие живого возбудителя. Обладая высокой чувствительностью и специфичностью, метод по праву является "золотым стандартом" для диагностики возбудителей УГИ. Однако он имеет ряд недостатков. Его можно применять в лабораториях, где имеются условия для содержания культур. Метод дорогостоящий и для массовой диагностики в силу этого не приемлем. В ряде случаев требуется длительное время для выполнения анализа.