Функционирование и регуляция Ca2-активируемых калиевых каналов эритроцитов

• Автор: Петрова, Ирина Викторовна
• Шифр специальности: 14.00.17
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 181 с. : ил.

МИНИСТЕРСТВО ЗРАВООХРАНЕНИЯ РОССИИ СИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ТОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ИНСТИТУТ ФАРМАКОЛОГИИ
ПЕТРОВА ИРИНА ВИКТОРОВНА
ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ И РЕГУЛЯЦИЯ Са2+- АКТИВИРУЕМЫХ КАЛИЕВЫХ КАНАЛОВ ЭРИТРОЦИТОВ
на соискание ученой степени доктора биологических наук
На правах рукописи
14.00.17 - Нормальная физиология
ДИССЕРТАЦИЯ
ТОМСК

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ЕЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Са2+- активируемые калиевые каналы эритроцитов
1.1.1 Общая характеристика
1.1.2 Влияние химических и физических факторов на Са2+-активируемые калиевые каналы. '
1.1.3 Регуляция Са2+- активируемых калиевых каналов
1.1.4 Функциональная роль Са2т- активируемых калиевых каналов
1.2 Метаболизм кальция в эритроцитах и его регуляция
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Объекты исследования
2.2 Взятие крови и получение эритроцитов
2.3 Использованные растворы и реактивы
2.4 Метод регистрации мембранного потенциала в суспензии эритроцитов
2.5 Расчет параметров Са2+- индуцированного гиперполяризационного ответа эритроцитов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Механизм формирования Са2+- индуцированного гиперполяризационного ответа
3.2 Регуляция Са2+-активируемых калиевых каналов эритроцитов
3.2.1 Влияние ингибиторов калиевых каналов на Са2+- зависимую калиевую проницаемость мембраны эритроцитов
3.2.2 Роль Са2+-насоса в регуляции Са2+- активируемых калиевых каналов
3.2.3 Влияние ингибиторов кальмодулина на Са2+-зависимую калиевую проницаемость мембраны эритроцитов
3.2.4 Регуляция Са2+-активируемых калиевых каналов эритроцитов физико-химическими факторами

3.2.5 Изучение влияния агонистов адренэргических рецепторов на Са -зависимую калиевую проницаемость мембраны эритроцитов.
3.2.6 Исследование роли цАМФ-зависимой протеинкиназы и протеинкиназы С в регуляции Са2 -активируемых калиевых каналов эритроцитов.
3.2.7 Изучение роли О-белков в регуляции Са2+-зависимой калиевой проницаемости мембраны эритроцитов.
3.3 Характеристика Са2+-зависимой калиевой проницаемости мембраны эритроцитов при патологии
3.3.1 Характеристика Са2+-зависимой калиевой проницаемости
мембраны эритроцитов у больных раком легкого.
3.3.2 Динамика параметров Са2 -индуцированною
гиперполяризационного ответа эритроцитов у больных раком легкого в процессе противоопухолевой химиотерапии.

3.3.3 Характеристика Са -зависимой калиевой проницаемости
мембраны эритроцитов у больных с опухолями головы и шеи до и после проведения противоопухолевой терапии.
'у I
3.3.4 Характеристика Са“ -зависимой калиевой проницаемости
мембраны эритроцитов у больных раком желудка и толстого
кишечника.
3.3.5 Сравнительная характеристика параметров Са2+-зависимой
гиперполяризации эритроцитов у больных с опухолями различной локализации.
3.3.6 Сравнительная характеристика Са2+-индуцированного гиперполяризационного ответа эритроцитов у больных с опухолями и воспалительными процессами соответствующей локализации.
3.3.7 Характеристика Са2+-зависимой калиевой проницаемости
мембраны эритроцитов у больных микросфероцитозом.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

m-хлорфенилгидразон) ("Calbiochem", США); A23187, холинхлорид, тритон Х100, валиномицин, дибутирил-цАМФ, diS—С3-(5)
(диизопротилтиодикарбоцианин иодид), стауроспорин (антибиотик АМ-2282), NaF, А1С13 ("Sigma", США), норадреналин, мезатон (Биопром, Россия).
Растворы SITS, R24571, готовились на диметилсульфоксиде ("Serva", Германия); растворы А23187, СССР, валиномицина, diS-C3-(5) - на этиловом спирте. Конечная концентрация растворителя в среде инкубации эритроцитов не превышала 0,5% и не оказывала влияния на активность Са2+-активируемых К+-каналов. Все остальные растворы препаратов готовили на основе деионизированной воды.
2.4. Метод регистрации мембранного потенциала в суспензии эритроцитов.
Для регистрации изменений мембранного потенциала эритроцитов в ответ на увеличение внутриклеточной концентрации ионов кальция использовался метод, предложенный в работах [231, 310] и основанный на том, что в присутствии протонофора распределение протонов зависит от мембранного потенциала Ет как Ет = RT/F (pHj - рН0). Здесь pH, и рН0 -значения pH цитоплазмы и среды инкубации, соответственно. При низкой буферной емкости среды инкубации (в наших условиях она примерно в 100 раз меньше буферной емкости цитоплазмы) изменениями pH, можно было пренебречь, а его квазистационарный уровень определялся при гемолизе клеток в присутствии детергента.
Эксперименты проводились по следующему плану. К 2,85 мл (или 1,9 мл) среды N, содержащей примесный кальций, добавляли 150 мкл (или 100 мкл) упакованных эритроцитов. Через 5 мин инкубации при 37°С и постоянном перемешивании добавляли протонофор СССР до конечной концентрации 20 мкМ и еще через 2 мин - 0,5 мкМ кальциевого ионофора А23187, затем через 3, 5, 6 или 10 мин вносили 30 мкМ СаСЬ, еще через 2 мин после этого добавляли СаСЬ до концентрации 380 - 400 мкМ.