Основы патогенеза, принципы диагностики и специфической коррекции геморрагической лихорадки Эбола в эксперименте

• Автор: Чепурнов, Александр Алексеевич
• Шифр специальности: 14.00.16
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 245 с.

Министерство здравоохранения Российской Федерации Государственный научный центр биотехнологии и вирусологии
"Вектор"
На правах рукописи
Чепурнов Александр Алексеевич
Основы патогенеза, принципы диагностики и специфической коррекции геморрагической лихорадки Эбола в
эксперименте.
14.00.16 - патологическая физиология
Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук
Научный консультант: С.И.Колесников, академик РАМН.
Кольцово - 1998 г.
ОГЛАВЛЕНИЕ
Список использованных сокращений
Введение
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Эндотоксический шок при геморрагических
вирусных лихорадках
1.1.1. Геморрагические вирусные лихорадки
1.1.2. Развитие эндотоксического шока при геморрагических лихорадках
1.1.3. Филовирусные инфекции
1.2. Характеристика геморрагической лихорадки Эбола
1.2.1. Этиология
1.2.2. Эпидемиология
1.2.3. Устойчивость к химическим и физическим
факторам
1.2.4. Патология
1.2.5. Диагностика
1.2.6. Специфическая профилактика и лечение
1.2.7. Лабораторные животные для изучения
лихорадки Эбола
1.2.8. Заключение по обзору литературы
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Биологическая безопасность
2.2. Вирусные препараты
2.3. Животные
2.4. Культуры клеток, питательные среды и
сыворотки, использованные в работе
2.5. Титрование вирусных препаратов
2.5.1. Титрование вируса Эбола (ВЭ) методом
негативных колоний под агаровым покрытием
2.5.2. Титрование ВЭ на морских свинках
2.5.3. Титрование ВЭ на новорожденным белых мышах
2.6. Проверка отсутствия остаточной инфекционное™ инактивированных препаратов
ВЭ на новорожденных белых мышах
2.7. Определение виремии в пробах крови экспериментальных животных
2.8. Серологические реакции
2.8.1 Реакция связывания комплемента (РСК)
2.8.2. Реакция нейтрализации (PH)
2.8.3. Иммуноферментный анализ (ИФА)
2.8.4. Непрямой метод флюоресцирующих антител (НМФА)
2.9. Иммуногистохимические исследования
2.10. Оценка инфекционное™ и отбор проб
2.11. Гематологические методы
2.12. Методы изучения клеточного иммунного ответа
2.13. Биохимические методы
2.14. Методы исследования системы гемостаза
2.15. Оценка влияния инактивированного вируса Эбола на колониеобразующую активность гемопоэтических предшественников у человека
2.16. Получение инактивированных цельновирионных препаратов для иммунизации и вакцинации экспериментальных животных
2.17. Получение рекомбинантных штаммов вируса осповакцины
2.18. Оценка иммуногенности инактивированных цельновирионных препаратов и рекомбинантных
штаммов ВОВ
2.19. Оценка протективности
2.20. Иммунизация животных
2.20.1. Иммунизация кроликов
2.20.2. Иммунизация овец и коз
2.21. Отбор крови у животных
2.22. Инактивация иммунных сывороток
2.23. Фракционирование иммуноглобулинов
спиртовым осаждением на холоду по Кону
2.24. Определение концентрации белка
2.25. Испытание козьего иммуноглобулина
против болезни Эбола на добровольцах
2.25.1. Введение иммуноглобулина
2.25.2.Общее исследование состояния здоровья
добровольцев
2.25.3. Изучение клинико-лабораторных
показателей крови и мочи
2.26. Методы определения лечебного и
профилактического эффекта иммуноглобулина
2.27. Получение ДНК-зондов для определения
РНК вируса Эбола
2.28. Статистическая обработка результатов
Глава III. Патофизиологические изменения,
влияющие на развитие эндогенного шока
при экспериментальной инфекции Эбола
3.1. Селекция лабораторных штаммов вируса Эбола
3.2. Исследование фагоцитарного ответа у восприимчивых и невосприимчивых к вирусу
Эбола животных
3.3. Изменение биохимических и гемостатических показателей у морских свинок при введении
Антигенные различия между двумя штаммами не симметричны. При исследовании в радиоиммунном анализе антисыворотки к штамму Судан в 2,6-3,4 раза слабее реагировали с антигенами штамма Заир, чем с гомологичным антигеном, и в то же время, антисыворотки к штамму Заир вступали в реакцию с антигеном штамма Судан в 1,3-1,6 раза слабее, чем с гомологичным антигеном [94]. Этот пример иллюстрирует важность использования антигенов как Заир, так и Судан при проведении серологических обследований.
Вирионная РНК вируса Эбола является негативной одноцепочечной, и вирусы реплицируются подобно другим вирусам с негативным геномом [Kiley, М.P., et al., 1982]. Из клеток, инфицированных ВЭ, было выделено 6 образцов моноцистронных предшественников РНК (м-РНК). Они управляют синтезом подлинных вирусных белков в протеин-синтезирующей системе in vitro. Не обнаружены м-РНК для белка L. РНК, выделенная из очищенных вирионов, гибридизировалась с каждым из образцов м-РНК, что подтверждает негативную природу генома.
Проведенное исследование структуры генома ВЭ свидетельствует, что вирус происходит от предшественника, который, кроме того, дал начало семействам Paramyxoviridae и Rhabdoviridae. Члены этих трех семейств объединяются многими свойствами, включая общие последовательности вирионной РНК, которые играют роль в вирусной репликации [Волчков В.Е., и др., 1992, Muhlberger Е., etal., 1992].
Инфицированные вирусом клетки содержат видимые
цитоплазматические тельца включения, состоящие из вирусной нуклеокапсидной массы. Окончательное почкование вирионов происходит на клеточных мембранах.