Нестабильность хромосомы 6 при плоскоклеточном раке шейки матки

• Автор: Атталеб Мохаммед
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 119 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список основных сокращений
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Молекулярно-генетические аспекты
патогенеза рака шейки матки
1.1. Роль вирусов папиллом (HPV) в патогенезе рака шейки матки
! .2. Микросателлиты, как способ исследования нестабильности
генома
1.3. Потеря гетерозиготности (LOH) при раке шейки матки
Глава 2. Материалы и методы
Список использованных растворов
2.1 .Клинические материалы
2.2. Выделение ДНК из опухоли шейки матки и нормальных тканей
2.3. Тестирование клинических материалов иа присутствие
ДНК HPV 16 и 18 типов
2.4. Определение потери гетерозиготности ДНК из опухолей
шейки матки
2.4.1 .Условия проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР)
2.4.2. Электрофорез продуктов ГІЦР в агарозном геле
2.5.Выявление продуктов амплификации путем гибридизации с радиоактивно-меченным олигонуклеотидом (СА)іг
2.5.1. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации в денатурирующем полиакриламидном геле
2.51. Перенос ДНК на нейлоновую мембрану
2.5.3. Получение меченого микросателлитного зонда
2.5.4. Гибридизация ДНК, иммобилизованной на мембранах
2.6, Выявление продуктов амплификации методом серебрения
2.7, Анализ ДНК в препаратах рака шейки матки, подвергнутых
а и кр о д и ссек ц и и
2.7.1 .Выделение ДНК из отдельных участков опухолей
шейки матки
2.7.2 Определение потери гетерозиготности в ДНК из отдельных участков опухолей шейки матки
Глава Ъ. Результаты
3.1. Определение типа HPV в опухолях шейки матки методом ПНР
3.1.1. Использование универсальных праймеров
3.1.2. Использование типоспецифических праймеров
3.2. Анализ аллельной нестабильности хромосомы 6 в опухолях
шейки матки
3.2..!. Выбор оптимального метода детекции потери гетерозиготности
3.2..2. Результаты исследования короткого плеча хромосомы
3.2..3. Результаты исследования длинного плеча хромосомы
3.3. Выявление возможной корреляции между аллельной нестабильности
и клиническими параметрами опухоли
3.4. Анализ микросателлитной нестабильности в опухолях
шейки матки
Я.5. Исследование аллельной нестабильности в препаратах рака шейки матки е помощью микродиссекции

Я .5.1. Анализ частоты LOH в различных участках опухолей
шейки матки, подвергнутых микродиссекции
3.5.2. Клональные и субклональныеаллельные делеции
хромосомы
Г лава 4. Обсуждение результатов
Глава 5. Выводы
Г лава 6. СПИСОК ЛИТврЯТурЫ

2.1.Клинические материалы.
Образцы ража шейки матки, а также морфологически нормальных прилегающих тканей были нам любезно предоставлены сразу после оперативных вмешательств по поводу рака шейки матки в отделениях гинекологии и радиохирургии РОНЦ им.Н.Н. Блохина РАМН г.Москва, руководимых д.м.н.лроф. Козаченко В.П. и к.м.н. Нечушкиным М.И.
После установления клинического диагноза и гистологической характеристики опухоли в отделении патоморфологии РОНЦ РАМН д.м.н. А.В Смирновым, ткани помещали в жидкий азот, где они хранились до выделения ДНК. Нами было исследовано 64 образца плоскоклеточного рака шейки матки на разных стадиях опухолевой прогрессии, классифицированных согласно критериям ВОЗ. Опухоли были получены от больных в возрасте от 26 лет до 71 года. Для всех опухолей были известны гистологическая характеристика, уровень циффиренцировки и наличие метастазов.
2.2. Выделите ДНК из опухоли шейки мазки и нормальных тканей.
Выделение ДНК проводилось с помощью гуанидинизотноцианата по классической методике (Chirgwin et al.,1979) с небольшими модификациями для одновременного выделение ДНК и РНК (Спитковекий и др., 1986).
Замороженные в жидком азоте материалы разрушали до порошкообразного состояния в тефлоновой кювете дисмембратора фирмы Braun в течение 20-30 сек. Полущенный порошок ресуспендировали в гуанидинизотиоцианатном буфере с помощью гомогенизатора Dounce (Wheaton) . Суспензию прогревали 5 мин. при 65 0 С, центрифугировали при 3000об/мнн 10 мин , наслаивали на раствор 5,7М