Механизмы внутриклеточной сигнализации при реинициации мейоза в ооцитах сельскохозяйственных животных

• Автор: Денисенко, Виталий Юрьевич
• Шифр специальности: 06.02.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 239 с. : 15 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Механизмы формирования доминантного фолликула у сельскохозяйственных животных
1.1.1. Селекция доминантного фолликула крупного рогатого скота
1.1.2. Особенности фолликулогенеза свиней
1.1.3. Влияние стероидных гормонов на кальциевый обмен
1.1.4. Процессы атрезии в фолликуле
1.2. Интрацеллюлярные механизмы реинициации мейоза в ооцитах
животных
1.3. Влияние цАМФ на внутриклеточный кальциевый обмен

Высвобождение ионов Са2+ из внутриклеточных депо

1.4.1. Активация инозитол-1,4,5-трисфосфатом кальциевых каналов внутриклеточных везикул
1.4.2. Кофеинчувствительные (рианодинчувствительные) кальциевые каналы внутриклеточных кальциевых депо
1.4.3. Эндоплазматический ретикулум как динамичный внутриклеточный резервуар кальция
1.5. Фосфорилирование белков как механизм переключения функциональной активности клеток
1.5.1. Участие протеинкиназы С в обмене внутриклеточного кальция
1.5.2. Регуляция кальциевого обмена протеинкиназой А
1.6. Участие вторичных внутриклеточных посредников в действии пролактина и соматотропина на клетки млекопитающих
1.7. Влияние ГТФ на освобождение Са2+ из внутриклеточных депо
1.8. Система вторичных посредников в ооцитах и клетках гранулезы

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объект исследований
2.2. Выделение ооцит-кумулюсных комплексов и клеток гранулезы
2.3. Оценка морфофункционального состояния ооцитов и клеток гранулезы
2.3.1. ВСВ-тестирование популящш донорских ооцитов свиней
2.3.2. Нагрузка зондами Фура-2АМ и хлортетрациклином
2.3.3. Измерение флуоресценции
2.4. Культивирование ооцитов свиней
2.5. Получение эмбрионов коров из ооцитов, созревших в системах дозревания с соматотропином
2.6. Цитогенетические исследования ооцитов и эмбрионов крупного рогатого скота
2.7. Микроскопирование, микрофотосъемка и статистическая обработка полученных данных
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Изучение механизмов высвобождения внутриклеточного Са2+ в
ооцитах свиней, выделенных из яичников на стадии фолликулярного роста ;
3.1.1. Активация иролактином, теофиллином и гуаниновыми нуклеотидами кальциевых каналов внутриклеточных депо в ооцитах свиней
3.1.2. Эффект хлортетрациклина на проникающую способность низкомолекулярных соединений в клетки гранулезы свиней
3.1.3. Взаимодействие в ооцитах свиней между 1Р3- и рианодинчувствительными внутриклеточными депо, активируемыми пролактином и ГТФ

3.1.4. Взаимодействие в ооцитах свиней между 1Р3- и рианодинчувствительными внутриклеточными депо, активируемыми теофиллином, дбцАМФ и ГДФ
3.1.5. Влияние стероидных гормонов на взаимодействие в ооцитах
свиней между 1Р3- и рианодинчувствительными внутриклеточными депо,
активируемое пролактином, СТГ и теофиллином

3.1.6. Освобождение Са2+ из внутриклеточных депо растущих и завершивших стадию роста ооцитов свиней
3.1.7. Интрацеллюлярные процессы, детерминирующие механизмы воздействия соматотропина на мобилизацию кальция при реинициации мейоза в ооцитах коров и свиней
3.2. Изучение механизмов высвобождения внутриклеточного Са2+ в ооцитах свиней, выделенных из яичников на стадии желтого тела
3.2.1. Активация пролактином, теофиллином и гуаниновыми нуклеотидами кальциевых каналов внутриклеточных депо ооцитов свиней
3.2.2. Взаимодействие в ооцитах свиней между 1Р3- и рианодинчувствительными внутриклеточными депо, активируемыми пролактином, теофиллином и гуаниновыми нуклеотидами

3.3. Изучение механизмов высвобождения внутриклеточного Са2+ в клетках гранулезы свиней, выделенных из яичников на стадии фолликулярного роста
3.3.1. Взаимодействие в клетках гранулезы свиней между 1Р3- и рианодинчувствительными внутриклеточными депо, активируемыми пролактином, теофиллином и гуаниновыми нуклеотидами

3.3.2. Влияние стероидных гормонов на взаимодействие в клетках гранулезы свиней между 1Р3- и рианодинчувствительными
может осциллировать и ограничиваться определенными пространственными районами клетки (Rieh et al., 2001). Таким образом, изменения в концентрации Са2+ и цАМФ не просто два изолированных линейных сигнальных процесса, но также они взаимодействуют на многих уровнях в форме сигнальной цепи. Наблюдение при изучении клеток различного типа показывает, что подъем цАМФ может ингибировать образование IP3 (Dodge, Sanborn, 1998; Vogl et al., 2000). С другой стороны, есть работы, где обнаружено, что цАМФ увеличивает образование 1Р3 в гепатоцитах (Pittner, Fain, 1989) и субмандибулярных клетках (Martinez, Zhang, 1998).
РЕЦЕПТОР -УПРАВЛЯЕМЫ Е КАНАЛЫ
ЯРОРМЭНЫ
ВХОД Са2+ В КЛЕТКУ
ICa/Na
КАНАЛЫ, УПРАВЛЯЕМЫЕ ВТОРИЧНЫМИ G-ЕЕЛСК ПОТЕНЦИАЛ
посредниками управляемые управляемые
i1Hpde' тромбоциты ЭНДОТЕЛИЙ КАНАЛЫ каналы
нейтрофилы сбонят тучные КЛЕТ ЦНС СГОНЯТ т „. карцинома и
А431 ГОР МСНЫ Г
НЕЙРОНЫ Т"ПИМта4/|ТЬ| НЕЙРОНЫ
са2+
Ca/Na

Са7*
цАМФ
цГМФ
фор*
G-БЕЛКИ
Н ATfflaaa Утип ПКА
A1F4 ‘
Ин-1Д4,5ЧРз Ин-1,3,4,5-0 G-БЕЛКИ GTPvS
АТФазэ МИОКАРДИАЛЬНОГО ТИПА
(рЛф
b==-. р ГА
ЭПР(ТЯЖЕЛАЯФ-Я) КАЛЬЦИОООМЫ ОКОЛОЦД МЕМБРАНА СЕКРЕТ ВЕЗИКУЛЫ КАЛОЕКВВОТРИН
НГ ОКСАЛАТ
ОБМЕННИК I
МИТОХОНДРИИ
ВЫХОД Са ИЗ КЛЕТКИ
ГОРМОНЫ
ХСа/Ыа+ОБМЕННИК Са ф.пкс
Рис. 1 Схема кальциевого внутриклеточного обмена.
Новые данные показывают, что фосфорилирование InslR-l ведет к росту освобождения Са2+ (Tang et al., 2003), тогда как другие показывают снижение Са2+ ответа (Nakade et al., 1994).