Разработка средств экстренной защиты животных от сибирской язвы

• Автор: Панков, Яков Геннадьевич
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 143 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕННЫХ ТЕРМИНОВ
ИФА иммуноферментный анализ
РП реакция преципитации
К.Р.С. крупный рогатый скот
ЛФ летальный фактор
РВ радиоинактивированная вакцина
нтд нормативно-техническая документация
СА соматический антиген
ПА протективный антиген
РТ Республика Татарстан
ЕПЭМ гидролизат плацентарно - эмбрионально - маточный
РСК реакция связывания комплемента
РИГА реакция непрямой гемагглютинации
С.-Х. сельскохозяйственный
ТУ технические условия
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
ПЦР полимеразная цепная реакция
МПА мясо-пептонный агар
МП Б мясо-пептонный бульон
ФБР фосфатно-буферный раствор
СФ спектрофотометр
ФЧ фагоцитарное число
ФИ фагоцитарный индекс
ФА фагоцитарная активность
СОДЕРЖАНИЕ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Классификация и биология возбудителя
сибирской язвы
2.2. Современные особенности эпизоотологии сибирской язвы и экологии возбудителя
2.3. Иммунопрофилактика сибирской язвы и методы оценки иммунного статуса у животных
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы и методы
3.1.1. Материалы
3.1.2. Методы
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Получение антигенов сибиреязвенного микроба для использования их в качестве иммуногенов для экстренной защиты животных от сибирской язвы
4.2. Разработка ИФА на основе противосибиреязвенной вакцины штамма 55 для определения в сыворотке крови специфических антител к возбудителю сибирской язвы
4.3. Изучение иммуногенных свойств полученных различными методами препаратов из противосибиреязвенной вакцины штамма
4.3.1. Изучение иммуногенной активности препаратов, полученных различными методами обработки сибиреязвенного микроба, на морских свинках и белых мышах
4.3.2. Установление оптимальной иммунизирующей дозы сибиреязвенной радиовакцины на морских свинках
4.3.3. Иммунологическая перестройка организма морских свинок в ответ на введение сибиреязвенной радиовакцины
4.3.4. Формирование противосибиреязвенного иммунитета у привитых радиовакциной кроликов
4.3.5. Оценка иммуногенных свойств радиовакцины
на кроликах
4.3.6. Определение иммуногенной активности радиовакцины
на овцах
4.4. Изучение эпизоотической ситуации по сибирской язве на территории Республики Татарстан и иммунологический мониторинг в отдельных районах Республики
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

Культивирование вакцинного сибиреязвенного штамма 55 проводили на питательной среде, разработанной в лаборатории музей штаммов ФГБУ «ФЦГРБ-ВНИВИ», где в качестве питательной основы служил ГПЭМ (щцролизат плацентарно-эмбрионально-маточный) - 60%, сыворотка крупного рогатого скота без консерванта - 20% и вода кипяченая - 20%. Концентрация вегетативных клеток в среде в конце культивирования (14-16 часов) составляла 250-300 млн./см . Данные вполне совпадают с данными автора вакцины шт. 55 В.А. Гаврилова (2000), который культивировал данный штамм на общепринятой питательной среде.
Учитывая достаточное количество протекгивного антигена и других компонентов роста, к выращенной биомассе с целью стабилизации и предотвращения дальнейшего спорообразования добавляли формалин (0,4-1,0 % к общему объёму биомассы), который одновременно способствует переходу токсина в анатоксин, затем разливали в колбы (флаконы) ёмкостью 100-500 см3 и подвергали гамма-облучению. Перед проведением лучевой инактивации микроба изучали радиочувствительность используемого тест-штамма к ионизирующей радиации. Для этой цели брали образцы культуральной микробосодержащей суспензии в различных концентрациях - 10, 100, 200 и 300 млн. м.к. в 1 см3 культуральной жидкости. Для определения инактивирующей дозы ионизирующих излучений испытывали различные режимы облучения с возрастающей дозой гамма-лучей в диапазоне доз 2, 5, 10 кГр. Облучение проводили на гамма-установке «Исследователь», в которой в качестве источника ионизирующего излучения используется радиоактивный кобальт-60 (Со60), испускающий гамма-кванты с максимальной энергией 1,33 МэВ периодом полураспада (Т 1/2) изотопа 5,272 года. Мощность экспозиционной дозы гамма-лучей в камере составляет (0,4-1,4) х 10б Р/ч, неравномерность дознош поля в рабочей камере составляет не более 10% при температуре от 18 до 40° С. Данный этап исследований проводили совместно с зав. отд. радиобилогии нашего Центра проф. Конюховым Г.В.
Образцы микробосодержащего материала помещали в рабочую камеру гамма-установки, переводили материал в зону облучения и включали установку на различные экспозиции (5,10,16,18 часов) облучения, при которых поглощенная доза