Совершенствование методов замораживания и оценки спермы хряков

• Автор: Шапиев, Исмаил Шапиевич
• Шифр специальности: 06.02.01
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Санкт-Петербург, Пушкин
• Количество страниц: 307 с. : ил.

/// /У- £/з- РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ НСТИТУТ ГЕНЕТИКИ И РАЗВЕДЕНИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ
ЖИВОТНЫХ
I) ШАПИЕВ ИСМАИЛ ШАПИЕВИЧ
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ЗАМОРАЖИВАНИЯ И ОЦЕНКИ СПЕРМЫ ХРЯКОВ
Специальность 06.02.01.- разведение,селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных
ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук
Санкт-Петербург - Пушкин 1998
Список сокращений
А - активность сперматозоидов АА - антимицин А АТФ- аденозинтрифосфат ВП- время переживания
ГХЦЖК-глюкозо-хелато-цитратно-калиевая среда ГХЦЖКУМ-глюкозо-хелато-цитрат-желтчно-калиевая среда унитиолом и мочевиной ГСХЦЖКУМ-глюкозо -сахарозно- хелато-цитрат-желточно-ка лиевая среда с унитиолом и мочевиной ГХЦС-8- глюкозо-хелато-цитрат-сульфатная среда ДНФ - 2,4-динитрофенол ЛДГ - лактат дегидрогеназа
М, Н - субъединицы,из которых состоят изоферменты ЛДГ ЛДГ1
НАДН- никотнамидадениндинуклеотид восстаноленный МЭ - а- меркаптоэтанол
ОЛЕП- среда для разбавления замороженной спермы
ОС - оплодотворяющая способность
ПН - пиридиннуклеотиды
РМС- редукция метиленовой сини
СД - стимуляция дыхания
Сц - сукцинаткалия
SH - сульфгидрильные гуппы
ТШ (ХШ) - температурный (холодовой) шок
ФАД - флавинадениндинуклеотид
ФП - пиридиннуклеотид
ФИП- среда для разбавления оттаянной спермы хряков Уэ - скорость эндогенного дыхания
Усц - скорость дыхания в присутствии экзогенного сукцината Уднф- скорость дыхания в присутствии динитрофенола
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Влияние охлаждения на живые клетки Концепция о механизмах криоповреждения и криоустойчивости клеточных структур
1.1.1. Температурный шок
1.1.2. Повреждение и устойчивость клеток при замораживании
1.2. Структурно-функциональные и биохимические изменения сперматозоидов при охлаждении и замораживании- оттаивании
1.2.1. Действие низких температур на подвижность, структуру и оплодотворяющую способность сперматозоидов
1.2.2 Некоторые биохимические изменения сперматозоидов при охлаждении и замораживании
1.3. Защита сперматозоидов от повреждающего
действия низких температур при криоконсервации
1.3.1. Защитные среды
1.3.2. Неспецифическое повышение устойчивости
клеток- как способ криопротекции сперматозоидов
1.4. Замораживание и оттаивание спермы хряков
1.4.1. Разбавление и подготовка спермы к замораживанию
1.4.2. Замораживание
1.4.3. Оттаивание спермы
1.5. Современные методы оценки качества спермы животных

поглащают такое же количество кислорода, как и до воздействия холода. Исследования Е.М.Платова (1970, 1973) показали, что снижение уровня АТФ в сперматозоидах быков и баранов при их охлаждении до +5-0° С не связано с нарушением механизмов синтеза АТФ, так как после нагревания охлажденной спемы до +18 и +37° С содержание АТФ-АДФ восстанавливается соответственно количеству подвижных клеток. Замораживание сперматозоидов быков и баранов в среде с желтком и глицерином не влияет на дыхание подвижных сперматозоидов быка первые десять минут и барана - 20 минут. В последующем наблюдается снижение дыхания и содержания АТФ, причиной чего являются криогенные повреждения митохондриальных мембран и разобщение дыхания и фосфорилирования.
Важным фактором, усиливающим проявление повреждающего действия охлаждения и замораживания-оттаивания на мембранные структуры сперматозоидов является развитие в них процессов пере-кисного окисления липидов. Как известно (Журавлев, 1968; Владимиров, Арчаков, 1972; Владимиров и др. 1975; Тарусов, 1976; Храпова, 1983), в норме свободнорадикальное окисление протекает во всех тканях живых организмов и при низкой интенсивности является одним из типов нормальных обменных процессов. В то же время при действии на клетки ряда повреждающих факторов, в том числе и низких температур, процессы перекисного окисления резко усиливаются, что приводит к нарушению функционирования мембранных структур (Храпова, 1981).
Сообщение об образовании токсических продуктов в сперме в результате развития процессов перекисного окисления липидов описано для спермы баранов охлажденных до +5°С (Jones, Mann, 1973), которое затем было подтверждено в других работах (Гуськов, 1984,