Миогенные клетки - предшественники в составе стромы печени зародышей

• Автор: Шевелева, Ольга Николаевна
• Шифр специальности: 03.03.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 129 с. : ил.

ОСНОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Развитие скелетных мышц в эмбриогенезе
1.1.1 Происхождение скелетных мышц в эмбриогенезе млекопитающих
1.1.2 Регуляция ранней и терминальной миогенной дифференцировки
1.1.3 Формирование скелетной мускулатуры конечностей
1.2 Источники регенерации скелетных мышц
1.2.1 Сателлитные клетки
1.2.2 Стволовые клетки мышечного происхождения
1.3 Влияние адгезии и факторов роста на развитие скелетных мышц в эмбриогенезе и миогенную диффернцировку в условиях in vitro
1.3.1. Роль межклеточного взаимодействия в развитии скелетных мышц
1.3.2. Роль внеклеточного матрикса в развитии скелетных мышц в эмбриогенезе и при миогеннной дифференцировке в условиях in vitro
1.3.3. Влияние различных факторов роста на миогенную дифферещировку
1.4 Альтернативные источники скелетных мышц
1.4.1 Клеточные популяции, способные к спонтанной миогенной дифференцировке in vivo
1.4.2 Плюри-и мультипотентные клетки, способные к индуцированной миогенной дифференцировке in vitro
1.4.3 Эктопические миогенные предшественники
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Исследование природы миотуб в первичных культурах клеток из печени 17-суточных зародышей
3.1.1 Морфологический анализ и динамика формирования миосимпластов в
культуре

3.1.2 Физиологические признаки миотуб в первичной культуре клеток из печени зародышей
3.1.3 Иммуноцитохимическое исследование на основные маркеры скелетных мышц миогенных структур в первичных культурах клеток из печени
зародышей

3.1.4 Оценка экспрессии генов мышечных маркеров в первичной культуре клеток из печени 17-суточных зародышей
3.2 Влияние белков внеклеточного матрикса на спонтанный миогенез в первичных культурах клеток из печени 17-суточных зародышей
3.2.1 Влияние фибронектинового покрытия на численность спонтанно образующихся миотуб в первичной культуре клеток из печени 17-суточных зародышей
3.2.2 Влияние коллагена I типа и ламинина на численность миотуб в первичной культуре клеток из печени 17-суточных зародышей
3.2.3 Адгезивные свойства миогенных предшественников в первичной культуре клеток из печени 17-суточных зародышей
3.3 Изучение миогенных потенций клеток из печени на разных сроках развития зародышей
3.3.1 Морфологический анализ и частота спонтанного образования миотуб в первичных культурах клеток из печени зародышей на 14, 15, 17 и 20-е сутки развития
3.3.2 Иммуноцитохимический анализ первичных культур клеток из печени 14, 15 и 20-суточных зародышей на основные маркеры скелетных мышц
3.3.3 Молекулярно-генетическое исследование миогенных потенций первичных культур клеток из печени на разных сроках развития зародышей
3.3.4 Миогенез в популяциях клеток из печени на разных сроках культивирования
3.3.5 Оценка содержания МСК в печени на разных сроках развития зародышей
3.4 Обнаружение миогенных предшественников в печени in situ
3.4.1 Спонтанное образование миотубоподобных структур из некультивированных стромалъных клеток печени зародышей в условиях in vivo
3.4.2 Исследование криостатных срезов 15-ти, 17-ти и 20-ти суточных зародышей
3.4.3 ПЦР-анализ свежевыделенных суспензий клеток из печени зародышей на разных сроках развития
3.5 Индукция миогенной дифференцировки в культурах МСК из печени зародышей
3.5.1 Попытки индукции миогенной дифференцировки в культурах МСК из печени зародышей с помощью 5-азацитидина
3.5.2 Попытки индукции миогенной дифференцировки в культурах МСК из печени зародышей с помощью кондиционированной среды
3.6 Миогенные потенции клеток, полученных из селезенки 17 суточных зародышей
3.6.1 Морфологический анализ и динамика формирования миотуб в культуре93
3.6.2 Физиологические признаки миотуб в первичной культуре клеток из зародышевой селезенки
3.6.3 Иммуноцитохимическое исследование миогенных структур в первичных культурах клеток из зародышевой селезенки на основные маркеры скелетных мышц
3.6.4 Оценка экспрессии генов мышечных маркеров в свежевыделенной суспензии и первичной культуре клеток из селезенки
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1 Исследование природы миотуб, спонтанно образующихся в
первичных культурах клеток из печени 17-суточных
зародышей

мышц, необходим для запуска миогенной программы
Рах7 транскрипционный фактор семейства Рах Маркер клеток сомитов, дермамиотома и всех сателлитных клеток, необходим для запуска миогенной программы Buckingham et al.,2003; Messina, Cossu, 2009
тцмр тяжелые цепи миозина [3 - одного из сократительных мышечных белков Маркер сателлитных клеток и одноядерных миобластов Балан и др., 2009
ТЦМ 2а тяжелые цепи миозина 2 типа- одного из сократительных мышечных белков Маркер зрелых миотуб Smerdu, Soukup, 2008
Культуры клеток отмывали от сыворотки 0,01М раствором PBS (pH 7.4)
и фиксировали 4% ПФА в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем
клетки промывали PBS и последовательно инкубировали в растворе для
пермеабилизации (0, 25% раствор Тритона Х-100 на трис-солевом буфере
TBS с добавлением 0,1% Твин 20) 30 мин при комнатной температуре и в
блокирующем растворе (3% БСА, 0,1% Твин 20, приготовленный на TBS).
Затем клетки инкубировали с первыми антителами ночь при 4°С. Антитела
до нужной концентрации разводили в блокирующем растворе. После