Молекулярно-генетические исследования функционирования полиморфных вариантов генов цитокиновой сети и биотрансформации ксенобиотиков при онкопатологии

• Автор: Васильева, Эльвира Мансуровна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 143 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Роль цитокинов в регуляции межклеточного гомеостаза
1.1.1. Классификация цитокинов иммунной системы: структурномолекулярная, биофункциональная, рецепторная
1.2. Молекулярно-генетические аспекты гуморального и клеточного иммунного ответа
1.2.1. Исследование роли генов, кодирующих цитокины противовоспалительного ряда (IL-1, IL6, a-TNF)
1.2.2. Исследование роли генов, кодирующих цитокины противовоспалительного ряда (IL4, IL10)
1.3. Определение содержания цитокинов в биологических жидкостях человека как метод оценки иммунного статуса
1.4. Молекулярно-генетические и биохимические аспекты изучения системы биотрансформации ксенобиотиков
1.4.1. Гены подсемейства СУР1А1
1.4.2. Гены подсемейства СУР2Е1
1.4.3. Гены микросомальной эпоксидгидролазы
1.4.4. 1ЧАО(Р)Н-хиноноксидоредуктаза
1.5. Основные положения генетического механизма иммунного ответа на ксенобиотики
1.6. Влияние иммунокорегирующих препаратов на показатели иммунного статуса
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.Объект исследования
2.2. Материалы исследования
2.3. Методы исследования
2.3.1. Генетические методы
2.3.1.1. Семейный анализ
2.3.2. Молекулярные методы
2.3.2.1. Выделение геномной ДНК методом фенольно-хлорофомной экстракции
2.3.2.2. Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК
2.3.2.3. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.3.2.4. ПДРФ - анализ
2.3.3. Определение продукции цитокинов клетками цельной крови ех vivo и на фоне приема иммуномодулятора in vivo
2.3.4. Определение концентрации цитокинов в сыворотке крови иммуноферментным методом

2.3.4.1. Определение содержания IL-lß, IL6, IL10 и a-TNF
2.3.4.2 Определение содержания IL1RA
2.3.4.3 Определение содержания IL2, IL4
2.3.5. Методы лабораторных исследований
2.3.5.1. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Метод Панченкова
2.5. Методы статистического анализа результатов исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Определение концентрации цитокинов в сыворотке крови иммуноферментным методом
3.1.1. Корреляционные взаимосвязи между показателями цитокинов у здоровых индивидов и онкологических больных
3.1.2. Анализ корреляционной взаимосвязи между продукцией цитокинов и аллельным состоянием полиморфных маркеров генов цитокинового каскада у здоровых индивидов
3.2. Анализ наследование аллелей генов, регулирующих цитокиновый каскад. Семейный анализ
3.3. Анализ сочетаний генотипов генов семейства IL-1 и их влияния на концентрацию цитокинов в сыворотке крови
3.4. Анализ продукции цитокинов у практически здоровых людей в сыворотке крови на фоне стимуляции клеток крови митогеном и после приема иммуномодулятора
3.5. Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов цитокиновой системы у здоровых индивидов и в группе с онкопатологией
3.6. Исследование роли межгенных взаимодействий
3.7. Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов системы биотрансформации ксенобиотиков у здоровых индивидов и в группе с онкопатологией
3.7.1. Анализ сочетаний генотипов полиморфных локусов в генах семейства интерлейкин-1 с геном биотрансформации ксенобиотиков НАЕ)(Р)Н-хиноноксидоредуктаза-1 у онкобольных
3.8. Анализ сочетаний генотипов полиморфных локусов в генах семейства интерлейкин-1 и гене клеточного цикла ТР53
3.8.1. Анализ ассоциаций гаплотипов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
РМЖ - рак молочной железы
CYP1A1 - цитохром Р-45 О 1А1
CYP2E1 - цитохром Р-450 2Е1
CRP - С-реактивный белок
ЕРНХ1 - микросомальная эпоксидгидролаза
IL-Iß - интерлейкин-1 бета
IL IRA - антагонист рецептора интерлейкина
IL1RI - рецептор интерлейкина-1 первого типа
IL2 - интерлейкин
IL4 - интерлейкин
IL 6 - интерлейкин
IL 10 - интерлейкин
NQ01 - ХА0(Р)Н-хиноноксидорсдуктаза
VNTR - (variable number tandem repeats) - варьирующее число тандемных повторов a-TNF - фактор некроза опухолей альфа
у2 - критерий значимости различий популяций по распределениям
частот генотипов р - вероятность
г - коэффициент корреляции

выработана единая классификация, рекомендованная к применению для исследователей (Nelson et al., 1996).
Таким образом, знания об экспрессии генов ферментов метаболизма в различных органах и тканях, а также выявление их субстратной специфичности создают возможность объяснения тканеспецифичного метаболизма ксенобиотиков (Ravindranath, 1998). Однако для этого необходимо изучение специфичного взаимодействия ферментов 1-й и П-й фазы в метаболизме различных по химическому составу эндогенных и экзогенных ксенобиотиков, в том числе и лекарственных препаратов, определение их активности и генотипирования полиморфных генов (Pelkonen, Raunio, 1997; Nebert et al., 2003).
1.4.1. Гены подсемейства CYP1A
Подсемейство CYP1A состоит из двух ферментов человека и других млекопитающих, и согласно стандартной номенклатуре Р450 они обозначаются CYP1A1 и CYP1A2. Эти ферменты представляют значительный интерес, так как они участвуют в метаболической активации многих проканцерогенов, а также индуцируются рядом соединений, представляющих интерес для токсикологии, включая диоксин.
Например, CYP1A1 метаболически активизирует многие соединения,
обнаруживаемые в табачном дыме. Характерной особенностью цитохрома
1А1 является его способность окислять плоские молекулы полициклических
ароматических углеводородов в конформационных закрытых позициях
результате таких реакций образуются ареновые окислы, которые недоступны
для эпоксидгидролаз, превращающих их в соответствующие
трансдигидродиолы. Отсюда вероятность взаимодействия таких
реакционноспособных метаболитов ковалентно связываться с белками и
нуклеиновыми кислотами, что обусловливает их цитотоксическое,
мутагенное и канцерогенное действие (Юрин, 2001). Изоформа Р4501А2
отличается субстратной специфичностью, катализируя процессы N-