Анализ полиморфизма гена BoLA-DRB3 в связи с генетической устойчивостью крупного рогатого скота к лейкозу и вирусоносительством

• Автор: Рузина, Мария Николаевна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 141 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ:
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Ген ВоЬА-ОКВЗ как один из ключевых генов Главного Комплекса Г истосовместимости
1.1.1. Главный Комплекс Гистосовместимости (ГКГ): общие положения
1.1.2. Главный комплекс гистосовместимости крупного рогатого скота (ВоЬА)
1.1.3. Ген ВоЬА-ОКВЗ: структура, функции, полиморфизм в популяциях
1.2. Вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС): патогенность, геном, методы детекции, распространение
1.2.1.Патогенност ь
1.2.2.Геном ВЛКРС
1.2.3.Методы детекции ВЛКРС
1.2.4.Мировое распространение ВЛКРС
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Выделение ДНК
2.2. Определение концентрации ДНК
2.3.Анализ полиморфизма гена ВоЬА-ОКВЗ методом ПЦР-ПДРФ
2.4. Анализ последовательностей От- и Ин-фрагментов гена рої ВЛКРС
2.5. Методы статистической обработки данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Сравнительный анализ разнообразия и характера распределения аллелей гена ВоЬА-ОКВЗ у изученных пород крупного рогатого скота
3.1.1. Оптимизация условий типирования аллелей гена ВоЬА-ОКВЗ
3.1.2. Сравнительный анализ разнообразия и характера распределения аллелей гена ВоЬА-ОКВЗ у изученных пород крупного рогатого скота
3.1.3. Сравнительный анализ разнообразия и характера распределения ВоЬА-ОКВЗ-
генотипов у изученных пород крупного рогатого скота
3.2. Анализ полиморфизма гена ВоЬА-ОКВЗ в связи с резистентностью к лейкозу, ряду других заболеваний, признаками молочной продуктивности
3.2.1. Анализ распределения аллелей гена ВоЬА-ОКВЗ в связи с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу
3.2.2. Распределение частот ВоЬА-ОКВЗ-генотипов, ассоциированных с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу у изученных пород КРС

3.2.3. Распределение частот аллелей гена ВоЬА-ОЯВЗ у исследованных пород КРС в связи с резистентностью к маститу д
3.2.4. Распределение частот аллелей гена ТЫЛ-В КВ 3 в связи с устойчивостью к другим заболеваниям 4
3.2.5. Распределение аллелей гена Во1А-В11ВЗ, ассоциированных с признаками молочной продуктивности
3.3. Идентификация новых форм и классификация изолятов вируса лейкоза крупного
рогатого скота России и Украины, на основе анализа изменчивости вирусного гена

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
выводы
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Одной из проблем российского животноводства является обеднение породного разнообразия крупного рогатого скота (КРС). В России в 80-90е гг XX века разводилось около 70 пород КРС различных направлений продуктивности и адаптированных к разнообразным климатическим и экономическим условиям нашей страны. Однако за последние двадцать пять лет более половины этих пород были потеряны. К 2001г. в Российской Федерации осталось 33 породы, из которых всего 16 имели достаточную численность для нормального воспроизводства, в 2003г. прошли бонитировку 22 породы. В 58 регионах России разводится черно-пестрая порода, в 30 -симментальская, в 28 — голштинская, в 23 — айрширская.
Таким образом, богатство генофонда КРС России, явившееся результатом долгой и успешной селекционной работы, обеспечивающей устойчивость животных к возбудителям болезней и внешним неблагоприятным условиям, оказалось частично утраченным. Обеднение генетических ресурсов сельскохозяйственных животных, в частности КРС, может привести к снижению эффективности селекции и снижению резистентности животных к постоянно эволюционирующим возбудителям заболеваний. В связи с этим, важно поддерживать максимально возможное разнообразие генофонда КРС.
Необходимым условием для проведения таких работ является проведение генетического мониторинга пород КРС на молекулярном уровне. Особый интерес представляют гены, участвующие в формировании хозяйственно-ценных признаков.
Одним из наиболее значимых в этом отношении генов является ген ВоВА-ВЯВЗ, кодирующий антигены класса II главного комплекса гистосовместимости КРС. Молекулы класса II располагаются на поверхности В-клеток, которые после внутриклеточного процессинга представляют чужеродные антигены Т-клеткам для обеспечения иммунного ответа гуморального типа. На сегодняшний день методом ПЦР-ПДРФ описано 54 аллеля данного гена, методом секвенирования - более ста. Высокое аллельное разнообразие данного гена обусловлено необходимостью связывания широкого спектра чужеродных антигенов. Установлены ассоциации некоторых аллельных вариантов данного гена с резистентностью к таким заболеваниям, как лейкоз, мастит, цистит, дерматофилоз, тейлериоз, кожному заболеванию, вызываемому иксодовыми клещами ВооркИш т1сгор1т.
Особенно актуальным является изучение полиморфизма гена ВоЬА-ВКВЗ в связи с резистентностью к лейкозу. Лейкоз крупного рогатого скота - хроническое инфекционное

Рисунок 6. Схематичное изображение вирусной частицы ВЛКРС (Gillet et.al 2007). Две коши одноцепочечной геномной РНК упакованы в вирусную частицу. СА (р24) белок формирует капсид, содержащий вирусную РНК и взаимодействующий с нуклеокапсидом NC (р12). Два ферментных белка (RT и IN), необходимые соответственно, для обратной транскрипции и интеграции вирусного генома так же содержатся внутри капсида. Белок матрикса МА (р!5) связывает капсид и внешнюю оболочку, состоящую из дилипидного слоя клеточного происхождения, в которую помещены комплексы белков gp51 SU и gp30

Транскрипция геномной РНК начинается на U3/R границе 5’LTR и заканчивается в районе сайта полиаденилирования (рис. 7).
Эта геномная РНК взаимодействует с матричным (МА) белком р!5 и белком нуклеокапсида NC р12 и димеризуется начиная с участка, окружающего сайт связывания праймер. Для эффективного инкапсулирования РНК требуется два участка: регион первичного сигнала, который расположен в нетранслируемом лидерном участке между сайтом связывания праймера и ближайшим к гену gag стартовым кодоном, и второй фрагмент внутри 5’-конца гена gag. Оба региона складываются во вторичные структуры, которые необходимы для