Сохранение редких и исчезающих видов растений в культуре in vitro и оценка уровня их внутривидового полиморфизма

• Автор: Жолобова, Ольга Олеговна
• Шифр специальности: 03.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Белгород
• Количество страниц: 153 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Список использованных сокращений
Введение
Глава 1. НАУЧНЫЕ ОСНОВЫ СОХРАНЕНИЯ РЕДКИХ И ИСЧЕЗАЮЩИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ
1.1. Способы сохранения редких и исчезающих видов растений
1.1.1. Сохранение редких и исчезающих видов растений в условиях in situ
1.1.2. Сохранение редких и исчезающих видов растений в условиях ex situ
1.2. Клональное микроразмножение как метод сохранения биоразнообразия
1.2.1 Клональное микроразмножение: достоинства, этапы, необходимые условия
1.2.2.Факторы, влияющие на микроразмножение растений
1.2.3. Трудности, возникающие при клональном микроразмножении растений
1.3. Особенности клонального микроразмножения редких и исчезающих видов растений
1.3.1. Этап введения в культуру in vitro
1.3.2. Этап микроразмножения редких и исчезающих видов
1.3.3. Этап индукции ризогенеза редких видов в культуре in vitro
1.3.4. Возможности длительного депонирования редких видов в культуре in vitro
1.4. Редкие виды как ценное сырье для получения биологически активных веществ
1.5. Использование молекулярно-генетических методов для оценки
биоразнообразия
1.5.1. Методы выявления полиморфизма ДНК редких и исчезающих видов растений .’
1.5.2. Особенности использования ДНК-маркеров в изучении генетического
разнообразия редких и исчезающих видов растений
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 3. ФОРМИРОВАНИЕ КОЛЛЕКЦИИ IN VITRO РЕДКИХ И
ИСЧЕЗАЮЩИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ ГБУ ВО «ВРБС»
Глава 4. УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДИК КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ РЕДКИХ И ИСЧЕЗАЮЩИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ
4.1. Изолирование и стерилизация первичных эксплантов
4.2. Оптимизация состава питательных сред и условий культивирования редких и исчезающих видов растений на этапе микроклонального размножения
4.3. Укоренение in vitro и адаптация регенерантов редких видов к условиям in vivo
4.3.1. Укоренение редких-видов в условиях культуры in vitro
4.3.2. Адаптация укорененных микропобегов к нестерильной среде
Глава 5. ОПИСАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ РЕДКИХ И ИСЧЕЗАЮЩИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ НА ОСНОВЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ
5.1. Генетический мониторинг популяций Matthiola fragrans Bunge с помощью RAPD- и AFLP-анализа
5.1.1. RAPD анализ генома Matthiola fragrans
5.1.2. Изучение генетического полиморфизма Matthiola fragrans при помощи AFLP-анализа
5.1.3. Сравнение методов RAPD- и AFLP-анализа Matthiola fragrans
Глава 6. ЭКОНОМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНЙЯ РЕДКИХ И ИСЧЕЗАЮЩИХ
ВИДОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
6-БАП - 6-бензиламинопурин
6-БАПр - 6-бензиламинопурин рибозид
2,4-Д - 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота
2 ip - 2-изопентениладенин
АК - аскорбиновая кислота
Z - зеатин
Zp - зеатин рибозид
Tdz -тидиазурон
К - кинетин
ИУК - 3-индолилуксусная кислота
НУК - нафтилуксусная кислота
ИМК - /?-индолил-3-масляная кислота
AFLP - Amplified Fragment Length Polymorphism; полиморфизм длин
амплифицированных фрагментов
CAPS - Cleaved Amplified Polymorphic Sequences; расщепленные
амплифицированные полиморфные последовательности ISSR - Inter Simple Sequence Repeat; межмикросателлитные фрагменты
ПЦР - Polymerase Chain Reaction; полимеразная цепная реакция
RAPD - Random Amplified Polymorphic DNA; произвольно
амплифицируемая полиморфная ДНК
SCAR - Sequence Characterized Amplified Region; амплифицированный
район с известной последовательностью

незрелых семян. Известно, что семена некоторых видов цветковых растений приобретают способность к прорастанию на начальных этапах эмбриогенеза до достижения полной зрелости. Прорастание семян в культуре in vitro возможно в период от приобретения не вполне развитыми зародышами относительной автономности до появления механизма торможения прорастания (Батыгина, 1981; 1990; 1985; 2002). «Автономность» авторами понимается, как
способность зародыша развиваться в нормальное растение вне материнского организма.
Стадия зрелости зародыша, оптимальная для введения в культуру in vitro, видоспецифична и кратковременна. Однако' к настоящему времени нет единого подхода для выделения стадии зрелости зародыша по анатомо-морфлогическим, биохимическим ; и физиологическим параметрам. Авторы используют различные характеристики зародыша для выделения стадии его «автономности»: размер зародыша (Лукина, 1999), возраст зародыша (число дней после опыления) (Батыгина, 1981; 1985; 2002; Золотухина, 2000; Куликов, 1998; Шевцова, 1986), степень прозрачности зародыша (Годовикова, 1990), степень морфологической дифференциации структур (Батыгина, 1981; 1985), соотношение между накоплением и расходом запасных веществ (крахмала) в тканях эндосперма и зародыша (Батыгина, 1981), фенологическая фаза зрелости семян (молочная, восковая, полная) (Болтенков, 2000; Ишмуратова, 1999). К примеру, для ряда' орхидных к-настоящему времени- выявлены оптимальные периоды для введения семян в культуру in vitro по периодам «автономности». В среднем у наземных орхидных умеренной зоны период «автономности» зародыша приходится на 20-50 день после опыления. У тропических видов период «автономности» наступает на 150 день (виды рода Paphiopedilum) (Лаврентьева, 2003) - 195 день после опыления Cymbidium hybridum hört. (Шевцова, 1986), что, по-видимому, связано с длительным периодом вегетации этих видов.