Разработка метода выделения и изучение характеристик антитромбина III как основы антитромботического лекарственного препарата

• Автор: Кряжевских, Ирина Сергеевна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 97 с. : ил.

Оглавление
Введение
Литературный обзор
Строение AT III и особенности его
функционирования
Способы выделения AT III и методы его
определения в концентрате
Лекарственные препараты на основе
белка антитромбина III
Основная часть
Материалы и методы
Обсуждения и результаты
Изучение сорбционных свойств аффинных
носителей
Разработка условий колоночной хроматографии
на Toyopearl AF-Heparin
Измерение специфической активности AT III
Оценка степени десорбции гепарина с матрицы
сорбента
Вирусная инактивация
Диализ концентрата AT III
Лиофилизация концентрата AT III
Изоэлектрофокусирование
Материальный баланс
Выводы
Список литературы

Список сокращений
СЗП - свежезамороженная плазма
ППУ - плазма после удаления факторов свертывания FVIII и FIX
KCH - криосупернатант
КП - криопреципитат
AT III - антитромбин III
FVIII - фактор свертывания VIII
FIX - фактор свертывания IX
PC - протеин С
PS - протеин S
АРС — активированный протеин С
vWF - фактор фон Виллебранда
TF - тканевой фактор
TFPI - ингибитор пути тканевого фактора
Fg - фибриноген
Fn - фибрин
t-PA - альтеплаза
НМГ - низкомолекулярный гепарин

Введение *
Циркуляцию крови в организме человека можно сравнить с течением реки по плодородной равнине. Высыхание реки становиться причиной увядания долины. Аналогично и в нашем организме, большие потери крови опасны для жизни человека. В этом случае его может спасти только одно -переливание крови. Но переливание цельной крови часто приводит к серьезным осложнениям, поэтому ученые последнего столетия задались вопросом: а можно ли разделить кровь на различные компоненты, чтобы избежать тяжелых осложнений? Над воплощением этой идеи в реальность стали работать ученые разных направлений: химики, биологи, медики. Так появилась отрасль науки, называемая трансфузиологией. Благодаря их усилиям сейчас лечатся многие заболевания крови, связанные с изменениями ее состава, спасаются многие жизни людей с сильными кровотечениями и гематологическими заболеваниями.
Первое переливание крови человеку от человека осуществил английский профессор акушерства и гинекологии Дж. Бланделл (1819). Он произвел переливание крови роженице, умиравшей от кровопотери. В 1832 г. подобная операция была проведена в России акушером Г. С. Вольфом. Его пригласили к женщине, которая находилась на краю гибели от массивной кровопотери после «искусственных» родов. Вольф решил, что единственная надежда спасти больную - новая пионерская операция, названная трансфузией крови. Лишь два года назад в Лондоне он узнал о трансфузии от знаменитого акушера и физиолога Джеймса Бланделла. По возвращении в Россию Вольф привез с собой одно из трансфузиологических приспособлений Бланделла и небольшой желудочковый насос Рида. С этим оснащением Вольф и выполнил трансфузию крови женщине, обозначенной как «М.Гл.», которая впоследствии выздоровела [1]. Но не все переливания
* Работа выполнена при участии к.х.н. Берковского А.Л.

Основная часть Материалы и методы
Хроматографическое выделение AT III
Оборудование:
Насос перистальтический «Minipuls 3», фирма-производитель Gilson, Германия.
Ячейка оптическая «Detector 112 UV/VIS», фирма-производитель Gilson, Г ермания.
Монитор проводимости «Conductivity Monitor», фирма-производитель GE Healthcare, Швеция.
Самописец «Rec 112», фирма-производитель GE Healthcare, Швеция.
Колонка ХК 16/20, фирма-производитель GE Healthcare, Швеция.
pH-метр «InoLab pH 730», фирма-производитель WTW GmbH, Г ермания.
Мешалка электронная «Stirrer Controller AS 645», фирма-производитель AND, Великобритания.
Весы аналитические «EK-300i», фирма-производитель AND, Япония.
Центрифуга настольная, фирма-производитель Jouan, Франция.
Система фильтрации «Millex-FA50», фирма-производитель Millipore, Франция.
Насос вакуумный «WP61 220 50», фирма-производитель Millipore,
Франция.
Реактивы:
№ Наименование Фирма- производитель Страна производитель Каталожный номер
1 Сорбент Toyopearl AF-Heparin 650 М Tosoh Corporation Япония 20031
2 Сорбент Heparin- Sepharose FF GE Healthcare Швеция
3 Трис (hydroxymethyl)aminomethane Merck Г ермания 1.08386.1000
4 Натрий цитрат дигидрат Fluka Бельгия 71404-5KG