Биотехнологические параметры разработки фагового препарата для индикации и идентификации бактерий Bacillus subtilis в пищевом сырье и продуктах питания

• Автор: Мустафин, Али Хамзеевич
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Ульяновск
• Количество страниц: 147 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Систематика и идентификация бактерий Bacillus subtilis
1.2. Распространение бактерий/?, subtilis в пищевых продуктах
1.3. Бактерии В. subtilis в организме животных
1.4. Бактериофаги и и их применение в лабораторной практике
1.4.1. Фагоидентификация бактерий и фаготипирование
1.4.2. Морфологические и биологические свойства фагов
1.4.2.1. Морфология негативных колоний
1.4.2.2. Морфология бактериальных вирусов
1.4.2.3. Развитие фаговых корпускул в клетке-хозяина
1.4.2.4. Реакция нарастания титра фага
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект, материалы и методы исследований
2.2. Результаты исследований и их обсуждение
2.2.1. Выделение бактерий В. subtilis из объектов
санитарного надзора
2.2.2. Поиск бактериофагов бактерий В. subtilis и селекция
клонов фагов
2.2.3. Изучение биологических свойств фагов бактерий В. subtilis
2.2.3.1. Морфология негативных колоний
2.2.3.2. Спектр литического действия
2.2.3.3. Литическая активность выделенных бактериофагов
В. subtilis
2.2.4. Характеристика выделенных фагов бактерий В. subtilis, выбранных для конструирования биопрепарата на основе индикаторных бактериофагов Bs-13 и Bs-16 серии УГСХА

2.2.4.1. Спектр литического действия бактериофагов Вв
и Вэ-16 серии УГСХА, входящих в состав биопрепарата
2.2.4.2. Специфичность действия фагов -13 и Вв-16 серии УГСХА, составляющих биопрепарат для индикации
бактерии Я зиЫШз
2.2.4.3. Температурная устойчивость фагов бактерий
В. тЫШз Вв-13 УГСХА и Вв-16 УГСХА, входящих в
состав биопрепарата
2.2.4.4. Устойчивость бактериофагов Вб-13 и Вэ-16 серии УГСХА, на основе которых разработан биопрепарат,
к воздействию хлороформа
2.2.4.5. Изменение литической активности фагов Вв-13 и Вв-16 серии УГСХА, составляющих индикаторный биопрепарат, при хранении
2.3. Технологические параметры по изготовлению и контролю лабораторной серии биопрепарата на основе индикаторных
бактериофагов Вв-13 и Вв-16 серии УГСХА
2.3.1. Производственные штаммы индикаторных культур
и порядок работы с ними
2.3.2. Методика культивирования индикаторных фагов,
входящих в состав биопрепарата
2.3.3. Приготовление питательной среды для культивирования бактериофагов, составляющих индикаторный биопрепарат
2.3.4. Технология изготовления бактериофагов, входящих
в состав биопрепарата
2.3.5. Контроль бактериофагов Вв-13 УГСХА и Вв-16 УГСХА, составляющих биопрепарат
2.3.6. Кондиция бактериофагов
2.4. Разработка схемы исследования материала с целью выделения и ускоренной
идентификации бактерий В. зиЫШз
2.4.1. Подбор параметров исследования
2.4.2. Методика фагоидентификации бактерий Я. зиЫШз
2.5. Разработка оптимальных условий постановки реакции нарастания
титра фага (РНФ)
2.5.1. Определение количественных показателей РНФ, имеющих диагностическое значение
2.5.2. Установление оптимального времени, обеспечивающего
наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями
2.5.3. Использование РНФ для обнаружения бактерий
Я. зиЫШь в объектах санитарного надзора
2.5.3.1. Исследование водопроводной воды, контаминированной бактериями Я. виЬШія, с помощью РНФ
2.5.3.2. Исследование комбикорма, контаминированного бактериями
Я. тЫШз с помощью РНФ
2.5.3.3. Исследование проб специй, искусственно контаминированных бактериями Я. га&Ц'/й, с помощью РНФ
2.5.3.4. Исследование проб мяса, искусственно контаминированного бактериями Я. зиЬШіз, с помощью РНФ
2.5.3.5. Результаты исследований проб молока на наличие бактерий
Я. л/Шй с помощью РНФ
2.6. Изучение эффективности поливалентного фагового биопрепарата
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ

обнаруживаются обычно не ранее 10 - 15 мин после инфекции фагом и проявляются в стирании четкой границы между ядерной субстанцией и цитоплазмой. В дальнейшем идет накопление фонда фаговой ДНК, её «конденсация» с образованием дискретных, лабильных структур с последующим их уплотнением (Тихоненко, 1968).
Вслед за образованием новых молекул фаговой ДНК и достижением ею определенного уровня, начинается синтез белков капсида и образование предшественника головки, в которую затем инкансидируется ДНК. Заключительный этап внутриклеточного развития - это самосборка фаговых частиц, разрыв клетки и высвобождение зрелых вирионов. Лизис инфицированных фагов бактерий связан, вероятно, с действием фаг -индуцируемых ферментов, которые способны деградировать клеточные стенки (Brison, 1978).
Важной биологической особенностью каждого конкретного бактериофага является величина латентного периода интервал между исчезновением внесенных вирионов и выходом в свету новых фаговых частиц (Ревенко, 1978).
Отечественными и зарубежнными исследователями описаны фаги с коротким и глинным латентным периодом. Полагают, что бактериальные вирусы медленно растущих микробов имеют, как правило, более продолжительный латентный период (Levintal, Fisher, 1952). Полагают, что длительный латентный период является более выгодным для вириона чем короткий, так как позволяет полнее использовать ресурсы клетки (Mercier, Rideaud, 1990).
При постоянных условиях эксперимента продолжительность латентного периода характерны для каждой конкретной системы фаг - клетка. (Гольдфарб, 1961).
Важной биологической особенностью является также «урожай фага». Этот показатель у аэробных спорообразующих бактерий колеблется в пределах от 8 до 1370 корпускул на бактерию (Азизбекян, 1974).