Протеомная характеристика сыворотки крови, цитозольной и микросомальной фракций гепатоцитов крыс при адаптации к характеру питания в процессе онтогенеза

• Автор: Шаранова, Наталья Эдуардовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты
КЯМ - инсулиноподобный фактор роста
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ПОЛ - перекисное окисление липидов
ДК - диеновые конъюгаты
МДА - малоновый диальдегид
ИФА - иммуноферментный анализ
БАВ - биологически активные вещества
Содержание
1. Введение
2. Обзор литературы. Современные проблемы нутрипротеомики
2.1 Влияние белкового компонента пищи на особенности протеома различных структур клеток
2.2 Влияние жирового компонента пищи на особенности
протеома различных структур клеток
2.3 Влияние различных БА компонентов пищи на особенности
протеома различных структур клеток
3. Экспериментальная часть
3.1 Материалы и методы
3.2 Результаты собственных исследований
3.2.1. Исследование онтогенетических особенностей процессов метаболической регуляции адаптационного статуса клетки
3.2.2 Характеристика протеомных особенностей сыворотки крови, микросомальной и цитозольной фракций клеток печени
крыс в онтогенезе
3.2.3 Исследование отдельных особенностей адаптационного статуса у крыс при включении в состав рациона таурина
на различных этапах онтогенеза
3.2.4 Характеристика протеомных особенностей сыворотки крови, микросомальной и цитозольной фракций клеток печени крыс
при включении в состав рациона таурина
3.2.5 Исследование отдельных особенностей адаптационного статуса у крыс при включении в состав рациона
коэнзима (ДО на различных этапах онтогенеза
3.2.6 Характеристика протеомных особенностей сыворотки крови, микросомальной и цитозольной фракций клеток печени крыс
при включении в состав рациона коэнзима (ДО
3.2.7 Исследование отдельных особенностей адаптационного статуса у крыс при модификации рациона по жировому компоненту

на различных этапах онтогенеза

3.2.8 Характеристика протеомных особенностей микросомальной и цитозольной фракций клеток печени крыс при включении в состав рациона коэнзима С>10 на фоне изменения
жирового компонента рациона
3.2.9 Исследование протеомных особенностей сыворотки крови, микросомальной и цитозольной фракций клеток печени крыс при включении в состав рациона <310 и таурина
с использованием масс-спектрометрии
4. Заключение
5. Выводы
6. Список литературы

помещали на 30 мин. в уравновешивающий буфер (6 М мочевина, 20% глицерина,
62,5 мМ Tris-HCl pH 6,8, 2% SDS, 20 мМ DTT, бромфеноловый синий следовые количества). Второе направление проводили на 12% ПААТ, в Tris-глициновом буфере pH 8,3 при охлаждении в следующем режиме: по 20 мА на стекло - 20 мин, затем по 40 мА на стекло до завершения электрофореза [123]. Полученные гели окрашивали серебром и анализировали с помощью программы PDQest 8.0 («Віо-Rad», США). Характеристическими признавались те белковые пятна, повторяемость которых превышала 75%.
Для гидролиза белка трипсином окрашенные серебром гели отмывали в растворе 50 мМ ферроцианид - 50 мМ тиосульфат серебра, в течение 1-2 мин., после чего кусочки геля промывали в деионизованной воде 3 раза по 15 мин. и затем инкубировали в 200 мкл 0.1 М NH4HC03 в 50 % растворе ацетонитрила в течение 15 мин. при 50°С. Раствор бикарбоната в ацетонитриле и воде удаляли, в пробирки с кусочками геля добавляли 100 мкл ацетонитрила. Через 15 мин ацетонитрил удаляли и к гелю добавляли 3 мкл раствора модифицированного трипсина (Promega) в 0.05 М NH4HC03, 15 мкг/мл. Гидролиз проводили в течение 18 ч при 37°С, затем к раствору добавляли 5 мкл 0.7 % ТФУ и инкубировали в течение часа. Полученный раствор использовали для регистрации MALDI-масс-спектров.
Для регистрации масс-спектров на поверхности масс-спектрометрической мишени смешивали по 0.5 мкл раствора образца и раствора 2,5-дигидроксибензойной кислоты (20 мг/мл в 50 % ацетонитриле в воде с 0.4 % ТФУ), полученную смесь высушивали на воздухе.
Масс-спектры регистрировали на времяпролетном MALDI-масс-спектрометре BRUKER Ultraflex II (Германия), оборудованном УФ лазером (Nd) в рефлекторном режиме с регистрацией положительных ионов. Идентификацию белков осуществляли при помощи программы Mascot. Поиск проводился в базе данных NCBI.nr среди белков всех организмов. Идентификацию белка считали достоверной, если вычисленный для него эмпирический критерий «Mascot score» превышал 63.