Механизмы обратимой метаболической депрессии и гибели гепатоцитов миноги речной (Lampetra fluviatilis L.) в период преднерестовой миграции

• Автор: Коновалова, Светлана Александровна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 135 с. : ил.

Список сокращений
Е ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Общая характеристика метаболической депрессии
1.2. Внутриклеточные механизмы развития метаболической депрессии
1.2.1. Организация энергетического метаболизма клетки
1.2.2. Синтез и расход АТФ при метаболической депрессии
1.2.3. Регуляция ионного гомеостаза
1.2.4. Протонная утечка через митохондриальные мембраны в период метаболической депрессии
1.2.5. Обратимое фосфорилирование белков
1.2.6. Изменение внутриклеточного pH в состоянии гипометаболизма
1.3. Регуляция концентрации свободного кальция
1.4. Жизненный цикл миноги
1.5. Механизмы гибели клеток
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Экспериментальные животные
2.2. Выделение гепатоцитов миноги
2.3. Определение концентрации адениновых нуклеотидов в гепатоцитах и кусочках печени миноги
2.3.1. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)
2.3.2. Люциферин-люциферазный метод
2.4. Определение митохондриального мембранного потенциала в гепатоцитах миноги

2.5. Определение выживаемости клеток
2.6. Измерение внутриклеточной концентрации свободного кальция «СаД)
2.7. Измерение внутриклеточного pH гепатоцитов миноги
2.8. Выявление апоптотических клеток
2.8.1. Выявление апоптотических и некротических клеток путем последовательного окрашивания акридиновым оранжевым и пропидием йодидом
2.8.2. Определение активности каспаз 3, 7,
2.8.3. Определение активности катепсина Б
2.8.4. Определение выхода цитохрома с из митохондрий методом иммунобл оттинга
2.9. Статистическая обработка полученных результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Концентрации адениновых нуклеотидов в кусочках печени и в гепатоцитах миноги в период преднерестовой миграции
3.2. Изменения митохондриального мембранного потенциала (ММП) в гепатоцитах миноги
3.3. Влияние ингибиторов и субстрата окисления на величину ММП и концентрацию АТФ в гепатоцитах миноги
3.4. Динамика внутриклеточной концентрации свободного кальция и состояние внутриклеточных кальциевых депо
3.4.1. Внутриклеточная концентрация свободного кальция
3.4.2. Состояние внутриклеточных кальциевых депо
3.5. Внутриклеточный pH в гепатоцитах миноги в период преднерестовой миграции

3.6. Выявление апоптотических клеток
4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Динамика митохондриального мембранного потенциала и концентрации адениновых нуклеотидов при метаболической депрессии
4.2. Роль свободного кальция в регуляции метаболической депрессии
4.3. Снижение внутриклеточного pH при метаболической депрессии
4.4. Механизмы гибели гепатоцитов. Апоптоз и аутофагия
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

флуоресценции красителя, которая в свою очередь линейно зависит от его концентрации. Логарифмическое преобразование отражает зависимость потенциала на мембране от концентраций положительно заряженных ионов, (в данном случае ТМЯМ), по обе стороны мембраны.
4. Для наглядного изображения распределения флюоресценции ТМЯМ внутри клетки весь диапазон возможных значений X (от 0 до 100 %) был разбит на 9 интервалов, как показано на рисунке 3. Каждому интервалу был присвоен определенный цвет.
Цвет 1 0-20 I ШЖШ
1 41-50 I I 51-60 I I 61-70 I I 71-8011
Рис. 7. Распределение значений X по интервалам в программе MicroPhoto.
Изображения, полученные на конфокальном микроскопе, кроме того, были количественно проанализированы с помощью программы Image J. Но каждому образцу было проанализировано не менее 50 клеток из неперекрывающихся областей изображения. Для каждой клетки была определена средняя интенсивность флуоресценции TMRM, затем из этого значения была вычтена фоновая флуоресценция (флуоресценция после добавления 40 мкМ FCCP). Полученные средние значения флуоресценции TMRM представлены в процентах от исходного значения. При анализе сезонной динамики данные за октябрь были приняты за исходное значение, при анализе влияния гормонов и дбцАМФ - контрольные значения (параллельные пробы без добавления гормонов и дбцАМФ) были приняты за исходные данные.