Цитоксичность и генотоксичность антител к ДНК сывороток крови больных системными аутоиммунными заболеваниями в культуре мононуклеарных клеток крови здоровых лиц

• Автор: Сабирзянова, Алсу Зуфаровна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 121 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Системная красная волчанка
1.2. Этиология системной красной волчанки
1.3. Ревматоидный артрит
1.4. Этиология ревматоидного артрита
1.5. Биологическая роль аутоантител к ДНК
в норме и патогенезе аутоиммунных заболеваний
1.6. Каталитические ДНК-гидролизующие анитела
и их биологическая роль в организме человека
1.7. Влияние антител к ДНК на клетки организма
1.8. Апоптоз.
Роль апоптоза в иммунных процессах
1.9. Нарушение апоптоза при СКВ и РА
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объект исследования
2.2. Выделение АТ к нДНК из крови человека
2.2.1. Получение сыворотки и осаждение АТ сульфатом аммония
2.2.2. Обессоливание белков
2.2.3. Фракционирование антител сыворотки крови
на ДЭАЭ-целлюлозе
2.2.4. Получение субфракций АТ к нДНК аффинной хроматографией на нДНК-целлюлозе микрокристаллической
2.3. Исследование влияния АТ к нДНК на клетки in vitro
2.3.1. Выделение мононуклеарных клеток, лимфоцитов
и моноцитов из периферической крови человека

2.3.2. Исследование жизнеспособности клеток
2.3.3. Культивирование клеток в присутствии
сывороток крови человека
2.3.4. Культивирование клеток в присутствии
субфракций IgG-AT к нативной ДНК
2.3.5. Определение концентрации клеточного белка
2.3.6. Определение количества потребления
глюкозы клетками
2.3.7. Определение продукции
перекиси водорода моноцитами
2.3.8. Оценка уровня повреждения ДНК клеток
2.3.8.1. Оценка уровня повреждения ядерной ДНК
методом флуоресцентной спектрофотометрии
2.3.8.2. Оценка уровня повреждения ядерной ДНК
методом «ДНК-комет»
2.3.9. Оценка апоптоза клеток методом проточной цитометрии
2.4. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Влияние АТ сывороток на МНК здоровых лиц in vitro
3.2. Влияние АТ сывороток
на моноциты здоровых лиц in vitro
3.3. Влияние субфракций IgG-AT к нДНК
на моноциты здоровых лиц
3.4. Генотоксичность субфракций IgG-AT к нДНК
3.5. Определение количества клеток на ранней стадии
апоптоза после инкубации с IgG-AT к нДНК
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ААТ - аутоантитело
АИЗ - аутоиммунное заболевание
АТ - антитело
МНС (HLA) - главный комплекс гистосовместимости
нДНК - нативная дезоксирибонуклеиновая кислота
ИдК - индекс ДНК-комет
МНК - мононуклеарные клетки
РА - ревматоидный артрит
РФ - ревматоидный фактор
СКВ - системная красная волчанка
ФНО - фактор некроза опухоли
ФСБ - фосфатно-солевой буфер
ЭБ - этидий бромид
BAFF - В-лимфоцит активирующий фактор
CD - cell differentiation antigens или cluster definition (антигены кластеров дифференцировки клеток)
CDR - гипервариабельный регион lg lg - иммуноглобулин PI - пропидий йодид

определенных условиях приводит к апоптозу.
Также показано in vitro, при СКВ нарушается способность макрофагов поглощать апоптотических тельца, что приводит к накоплению поздних апоптотических, появлению вторичных некротических клеток, продолжительной циркуляции в организме и презентации ядерных антигенов иммунной системе и нарушению аутотолерантности. Следствием этого является аутологичная активация Т-клеток, которые в свою очередь стимулируют В-клетки к генерации ААТ (Tas et al., 2006).
При РА в синовиальной оболочке присутствует относительно немного клеток в состоянии апоптоза, несмотря на наличие таких мощных киллерных стимулов, как гипоксия и ФНО-а.
Происходит активное ингибирование апоптоза, обусловленное изобилием антиапоптотических молекул, которые вырабатываются синовиоцитами и синовиальными лимфоцитами. Известно, например, что продуцируемый фибробластами интерферон-у предотвращает апоптоз Т-клеток. Принципиальное значение для понимания концепции патогенеза РА имеет нарушение апоптоза синовиоцитов, которое может быть следствием обнаруженной мутации гена р53, ответственного за подавление опухолевого роста. Генные мутации синовиоцитов, вероятно, вторичны по отношению к гипоксической внутрисуставной среде, поскольку выявляются только на поздних стадиях заболевания. Они могут происходить вследствие разрушительного влияния свободных радикалов кислорода, перекисных соединений, оксида азота и других генотоксических факторов микросреды воспаленного сустава на ДНК (Ярилин, 2003 б).