Глутатион S-трансферазы рыб из озер Северной Карелии

• Автор: Борвинская, Екатерина Витальевна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Петрозаводск
• Количество страниц: 132 с. : ил.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
1.1. Характеристика семейства глутатион S-трансфераз
1.1.1. Биологическая роль
1.1.2. Физико-химическая характеристика
1.1.3. Современная классификация
1.2. Глутатион S-трансферазы рыб
1.2.1. Структурные и функциональные особенности GST рыб
1.2.2. GST рыб как биомаркеры загрязнения окружающей среды
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Характеристика места сбора материала
2.3. Методы исследования
2.3.1. Разрушение клеток и экстракция
2.3.2. Спектрофотометрическое определение активности GST
2.3.3. Определение кинетических характеристик очищенного фермента
2.3.4. Определение концентрации белка
2.3.5. Гель-фильтрация
2.3.6. Аффинная хроматография
2.3.7. SDS-электрофорез
2.3.8. Изоэлектрическое фокусирование
2.4. Статистическая обработка данных
3.1. Влияние эколого - физиологических факторов на активность GST рыб
3.1.1. Видовая и тканевая специфичность активности GST рыб
3.1.2. Зависимость активности GST от пола
3.1.3. Влияние возраста на активность GST
3.1.4. Субстратная специфичность активности GST
3.1.5. Активность GST у рыб из водоемов подвергшихся техногенной трансформации

3.2.1. Методические особенности получения очищенного фермента
3.2.2. Физические свойства и субъединичный состав
3.2.3. Влияние pH среды на активность GST
3.2.4. Влияние температуры на активность GST
3.2.5. Кинетические свойства очищенного фермента
3.6. Субстратная специфичность
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
GST - глутатион-Б-трансфераза
GSH - восстановленный глутатион
CDNB - 1 - хлор -2,4-динитробензол
DCNB - 1,2-дихлор-4-нитробензол
/РВ - транс-4-фенил-3-бутен-2-он
БСА - бычий сывороточный альбумин
PBS - калий - фосфатный буфер
SDS - додецилсульфат натрия
EDTA - этилендиаминтетраацетат натрия
DTT - дитиотриэтол
ПААТ - полиакриламидный гель
АОЗ - антиоксидантная защита
ПОЛ - перекисное окисление липидов
UDPGT - УДФ - глюкуронилтрансфераза
РСВ - полихлорированные бифенилы
EROD - экоксирезоруфин-О-диэтилаза
ЖХВД - жидкостная хроматография высокого давления
ТМ - тяжелые металлы
ПАУ - полиароматические углеводороды
БП - бензпирен

Проведение ИЭФ. По завершению полимеризации гель помещали на специальный столик с постоянным охлаждением (10°С). Со стороны анода и катода к гелю прикладывали фильтровальную бумагу, смоченную Ш растворами Н3Р04 и ИаОН, соответственно. После этого на бумагу накладывали электроды и проводили изоэлектрофокусирование по схеме, описанной в таблице 8. Образцы белка и стандарты объемом до 20 мкл вносили непосредственно на поверхность геля с помощью микропипетки.
Таблица
Последовательность операций
Этап Сила тока, А Напряжение, V Мощность, W Время экспозиции, мин
Предварительное фокусирование 0,020 750 10
Внесение образца - - - -
Разделение 0,020 2000 10
Концентрирование 0,020 2500 20
После окончания ИЭФ гель подвергали окрашиванию азотнокислым серебром. Значения pH в геле определяли относительно белковых pi маркеров (Bio-Rad, USA).
2.4. Статистическая обработка данных
Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакетов программ Statistica 7 и Statgraphics Plus. Статистическую значимость различий оценивали по непараметрическому критерию (U) Манна - Уитни. Для оценки степени влияния факторов на активность GST использовали многофакторный дисперсионный анализ (MANOVA). Зависимость между исследуемыми параметрами выявляли с помощью корреляционнорегрессионного анализа. При этом учитывали коэффициенты ранговой корреляции Спирмена (rs), коэффициенты регрессии и коэффициенты