Характеристика новых линий репортерных мышей для изучения экспрессии фактора некроза опухолей in vivo и in vitro

• Автор: Кучмий, Анна Александровна
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 125 с. : ил.

Список сокращений
TNF - фактор некроза опухолей
tmTNF - трансмембранная форма фактора некроза опухолей
LT -лимфотоксин
TNFRp55 - рецептор фактора некроза опухолей
TNFRp75 - рецептор фактора некроза опухолей
IFNy - интерферон гамма
IL -интерлейкины
lg - иммуноглобулины изотипов М, А, G
ЛПС - липополисахарид (бактериальный эндотоксин)
Kat-TNF - линия репортерных мышей, в которых экспрессия TNF
сопровождается экспрессией красного флуоресцентного белка Katushka eGFP-TNF - линия репортерных мышей, в которых экспрессия зеленого
флуоресцентного белка eGFP регулируется промотором гена TNF
КаеСРР-ТОТ - двойные Т№-репортерные мыши с красным и зеленым флуоресцентными белками в качестве меток

Оглавление
Введение
Обзор литературы
Методы флуоресцентной визуализации
Разнообразие методов флуоресцентной визуализации для исследований in vivo
Флуоресцентные белки в качестве молекулярных меток
Методы направленного флуоресцентного мечения клеточных и молекулярных
мишеней
«Репортерные» линии экспериментальных животных для биологических исследований
Репортерные линии мышей с флуоресцентной меткой для изучения биологии TNF
Общие сведения о Факторе Некроза Опухолей: структура белка, регуляция биосинтеза
цитокина, рецепторы TNF
Мышиные модели для изучения функций TNF in vivo
Биологические функции TNF и актуальные вопросы биологии TNF
Преимущества «репортерных» линий мышей с флуоресцентным белком в качестве
метки для изучения биологии TNF
Материалы и методы
Результаты и их обсуждение
1. Получение и отбор линии трансгенных TNF-репортерных мышей
2. Экспрессия репортерных белков и TNF в миелоидных клетках репортерных мышей in vitro
3. Особенности экспрессии TNF и репортерных белков в культурах костномозговых макрофагов in vitro
4. TNF, экспрессируемый с трансгенной вставки в Kat-TNF мышах, является биологически неактивным
5. Экспрессия флуоресцентных белков и TNF в лимфоцитах репортерных мышей
6. Базальная экспрессия eGFP коррелирует с активностью промотора и уровнем транскрипции гена TNF
7. « Гомеостатическая» экспрессия репортерных для TNF белков
8. Использование TNF-репортерных мышей для гистологического анализа клеток, экспрессирующих TNF
9. Характеристика репортерных Kat-TNF мышей in vivo
Заключение
Выводы
Список литературы

В непосредственной регуляции стабильности мРНК в цитоплазме участвует ряд ARE-связывающих белков: ТТР, TIA-1, AUF-1 и HUR. Тристетрапролин (ТТР) способствует деградации мРНК путем взаимодействия с элементами базовых молекулярных механизмов утилизации мРНК (деаденилирование, декэппирование и экзонуклеазное разрушение). После стимуляции клеток ТТР фосфорилируется киназами р38/МК2 сигнального пути и отвлекается от мРНК TNF, таким образом, TNF мРНК оказывается защищена от деградации. Противовоспалительные цитокины (IL-4, TGFß) индуцируют транскрипцию ТТР (с участием STAT6, SMAD3/SMAD4 сигнальных молекул) и оказывают противовоспалительный эффект. Белок TIA-1 действует как трансляционный сайленсер. В инбредных линиях TIA-Г'' мышей на генетическом фоне С57/В16 спонтанно развиваются легкие симптомы артрита (Piecyk et al. 2000). Белок AUF-1 дестабилизирует мРНК TNF. HUR является единственным белком, который стабилизирует мРНК TNF, но одновременно он блокирует трансляцию мРНК (совместно с белком TIA-1) (Kontoyiannis et al 2002).
Рецепторы TNF.
На клеточном уровне биологические функции TNF являются результатом активации двух высокоаффинных рецепторов к TNF (TNFRs): рецептора TNF 1 типа (TNFRp55, CD 120b) и рецептора TNF 2 типа (TNFRp75, CD120b), TNFRp55 конститутивно экспрессируется практически всеми клетками организма; TNFRp75 экспрессируется Т клетками и клетками эндотелия без стимуляции, а также в ответ на стимул другими клетками гемопоэтического ряда (Vandenabeele et al. 1995). Кроме того предложен гипотетический механизм, когда tmTNF при связывании с р75 рецептором к TNF передает самостоятельный сигнал - явление «обратной передачи сигнала» лигандом (Horiuchi et al 2010).