Исследование биологических эффектов воздействия преобразованного солнечного света

• Автор: Фахранурова, Лилия Ильгизовна
• Шифр специальности: 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 108 с. : ил.

Глава 1. Общая характеристика работы
Глава 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Источники красного света
2.2. Механизмы действия красного света
2.3. Эффекты светового воздействия на культуру клеток и 24 эмбриональное развитие
2.4. Эффекты светового воздействия на сердечно-сосудистую 25 систему
2.5. Эффекты светового воздействия на физическую 28 работоспособность
Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Процедура облучения. Характеристики световых источников
3.2. Расчет доз излучения
3.3. Тест-система - клеточная культура
3.4. Тест-система - эмбриональные клетки
3.5. Тест-система - мыши линии СО
3.6. Тест-система - гипертензивные крысы
3.7. Определение концентрации АФК в водной среде
Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Влияние преобразованного солнечного света на жизнеспособность клеток
4.1.1. Определение дозы солнечного света, оказывающего 47 повреждающее действие на клетки
4.1.2. Сравнительный анализ протекторного действия ПСС и
светодиодной матрицы на жизнеспособность клеток.
4.1.3. Определение действия ПСС на жизнеспособность 49 эпителиальных клеток линии НЕр-2 и культуры фибробластов ЗТЗ clone

4.1.4. Влияние различных способов облучения на
фибробласты линии NCTC clone

4.2. Влияние преобразованного солнечного света на
предимплантационноё эмбриональное развитие зародышей мышей в условиях in vitro
4.2.1. Облучение СС-УФ (9,6 Дж/см2) и ПСС (9,9 Дж/см2) в 51 течение 7,5 мин
4.2.2. Облучение СС-УФ (19,2 Дж/см2) и ПСС (19,8 Дж/см2) в 52 течение 15 мин
4.2.3. Облучение СС-УФ (48 Дж/см2) и ПСС (50 Дж/см2) в 54 течение 37,5 мин
4.2.4. Количество аномально развитых эмбрионов в
зависимости от облучения
4.3. Влияние преобразованного солнечного света на
физическую работоспособность мышей и на структурные характеристики клеток сердечной мышцы
4.3.1. Влияние преобразованного солнечного света на
физическую работоспособность мышей
4.3.2. Влияние преобразованного солнечного света на
структурные характеристики клеток сердечной мышцы мышей
4.4. Влияние облучения преобразованным солнечным светом и
светодиодной матрицей на функциональные характеристики сердечной мышцы гипертензивных крыс
4.4.1. Ультраструктурный анализ миокарда крыс после
облучения преобразованным солнечным светом и светодиодной матрицей
4.4.2. Ультраструктурный анализ миокарда крыс после 66 облучения светодиодной матрицей
4.4.3. Анализ капилляров субэндокарда левого желудочка
крыс
4.5. Изучение роли активных форм кислорода, как возможных
регуляторов действия преобразованного солнечного света на культуре

клеток фибробластов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Приложение 1. Анализ бластоцист, сформировавшихся при различных способах и продолжительности облучения при культивировании доимплантационных эмбрионов (результаты 96 ч культивирования в условиях in vitro)
Приложение 2А. Динамика плавания мышей Приложение 2В. Ультраструктура кардиомиоцитов левого желудочка мышей
Приложение 3. Характеристики изометрических сокращений ПМ нормотензивных и гипертензивных крыс
Приложение 4А. Ультраструктура кардиомиоцитов левого желудочка крыс
Приложение 4В. Количественная морфологическая характеристика паренхиматозно-стромальных взаимоотношений миокарда крыс Приложение 5. Ультраструктура кардиомиоцитов левого желудочка крыс, облученных светодиодной матрицей.
Визуальный контроль состояния клеток проводился ежедневно с использованием инвертированного микроскопа Leika DMIL. Оценку жизнеспособности клеток проводили на микроскопе Axiovert 200 (Карл Цейс, Германия) с использованием окрашивания клеток набором L-7007 LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit (Invitrogen), в который входят два флуоресцентных красителя: SYTO 9 и иодид пропидия (SYTO 9 окрашивает все клетки в зеленый цвет, иодид пропидия окрашивает в красный цвет ядра погибших клеток).
В рамках задачи необходимо было решить ряд подзадач:
1. Определение дозы солнечного света, оказывающего повреждающее
действие на клетки.
Клетки (линии НЕр2 и ЗТЗ clone NIH фибробласты) были облучены однократно ксеноновой лампой разными дозами 0,3 Дж/см2 (2 с.), 6,5 Дж/см2 (50 с.), 19 Дж/см2 (150 с.), 77 Дж/см2 (600 с.), 154 Дж/см2 (1200 с.).
2. Сравнительный анализ протекторного действия ПСС и светодиодной матрицы на жизнеспособность клеток.
Эксперимент был выполнен по следующей схеме: посев клеток —> замена среды —* облучение определенной на первом этапе полулегальной дозой «солнечного света» (LD50) —> замена среды —> облучение в дозе 12, 8 Дж/см2 СС-УФ и 13,2 Дж/см2 ПСС (10 мин.), светодиодной матрицей в дозе 0,4 Дж/см2 (20 мин.). Оцененная плотность потока дополнительной оранжево-красной компоненты составляет 0,4 Дж/см2, что соответствует облучению светодиодной матрицей.
3. Определение действия ПСС на жизнеспособность эпителиальных
клеток линии НЕр-2 и культуры фибробластов ЗТЗ clone NIH.
Планшет с культурой был поделен на 5 групп: 1) интактный контроль; 2) контроль с ДМСО; 3) облучение «солнечным светом» - СС (19 Дж/см2); 4) облучение солнечным светом без УФ-компоненты - СС-УФ (12,8 Дж/см2), 5) облучение преобразованным солнечным светом - ПСС (13,2 Дж/см2). Время экспозиции - 10 мин.