Мембранотропные тканеспецифические биорегуляторы, выделенные из сыворотки крови и костной ткани млекопитающих

• Автор: Рыбакова, Елена Юрьевна
• Шифр специальности: 03.01.02, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 157 с. : ил.

Содержание
Список использованных сокращений

Введение
Глава 1. Литературный обзор
Мембранотропные гомеостатические тканеспецифические биорегуляторы
1.1. Экспериментальный подход, разработанный для исследования МГТБ
1.2. Физико-химические свойства и строение МГТБ
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Выделение и очистка биорегуляторов из сыворотки крови КРС и экстракта костной ткани крысы
2.1.1. Высаливание сыворотки крови и экстракта костной ткани
2.1.2. Выделение белка-модулятора из сыворотки крови и его очистка
2.1.3. Изоэлектрофокусирование фракций супернатантов и сывороточного белка-модулятора
2.1.4. Аффинная хроматография сывороточного биорегулятора
2.1.5. Определение концентрации белка
2.1.6. Электрофорез белковых фракций в полиакриламидном геле
2.1.7. Обращённо-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография
2.1.8. Масс-спектрометрическое изучение биорегуляторов
2.2. Изучение физико-химических свойств биорегуляторов, выделенных из сыворотки крови и костной ткани млекопитающих
2.2.1. Исследование биорегуляторов с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР)
2.2.2. Исследование биорегуляторов с помощью метода кругового дихроизма
2.2.3. Определение размеров частиц методом динамического лазерного светорассеяния
2.2.4. Определение аминокислотного состава.
2.2.5. Определение фрагментов первичных структур пептида и белка-модулятора, входящих в состав биорегулятора

сыворотки крови

2.2.6. Изучение липидной компоненты биорегулятора, выделенного из сыворотки крови
2.2.7. Изучение углеводной компоненты биорегулятора, выделенного из сыворотки крови
2.3. Изучение мембранотропной активности белков, выделенных из сыворотки крови и костной ткани млекопитающих.
2.3.1. Мембранотропная активность биорегуляторов
2.3.2. Биотестирование оросомукоида и его гликозидной
цепи
2.3.3. Изучение механизма инактивации сывороточного биорегулятора.
2.4. Изучение специфической биологической активности биорегуляторов, выделенных из сыворотки крови и костной ткани млекопитающих.
2.4.1. Исследование влияния сывороточного биорегулятора на состояние кожи тритона при роллерном культивировании in vitro.
2.4.2. Исследование влияния биорегуляторов, выделенных из сыворотки крови и костной ткани млекопитающих, на состояние регенерата хвоста тритона при роллерном культивировании in vitro
2.4.3. Морфометрическая оценка гистологических срезов
2.4.4. Исследование влияния сывороточного биорегулятора на ранозаживление кожной раны у мышей in vivo
Глава 3. Результаты и их обсуждение
3.1. Выделение МГТБ из сыворотки крови и костной ткани млекопитающих и их очистка
3.2. Изучение состава биорегуляторов и структуры их отдельных компонентов
3.3. Белок, модулирующий активность сывороточного биорегулятора (белок-модулятор)
3.4. Изучение специфической активности биорегуляторов, выделенных из сыворотки крови и костной ткани млекопитающих
3.4.1. Исследование влияния сывороточного биорегулятора на состояние кожи тритона при роллерном культивировании in vitro
3.4.2. Сравнительное исследование влияния сывороточного биорегулятора и биорегулятора, выделенного из костной ткани млекопитающих, на состояние регенерата

хвоста тритона при роллерном культивировании in vitro
3.4.3. Исследование влияния сывороточного биорегулятора на ранозаживление кожной раны у мышей in vivo
Выводы
Список литературы

упорядоченное состояние коллагеновых волокон в культурах опытной группы по сравнению с контрольной.
Наиболее выраженным протекторное действие биорегулятора, выделенного из склеры глаза, было на модели роллерного культивирования целого глаза тритона in vitro. В контрольной серии наблюдали нарушение адгезионных взаимодействий между тканями заднего отдела глаза, несмотря на сохранение их пространственной организации. Наблюдали гибель основных типов клеток в сетчатке, нарушалась целостность монослоя ПЭ -можно было обнаружить только одиночные меланофаги. В ростовой зоне глаза наблюдали большое количество новообразованных дедифференцированных клеток, которые смещались в область погибающей сетчатки и замещали фоторецепторные клетки и нейроны высших порядков. В склеральной оболочке наблюдали практически полную гибель и выселение фибробластов. В культурах контрольной и опытной серий в роговице отмечали гибель клеток эпителиального пласта. В культурах опытной серии (при воздействии биорегулятора в СМД) можно отметить сохранение адгезионных взаимодействий между тканями заднего сектора. В склере наблюдали присутствие жизнеспособных фибробластов, количество которых было больше приблизительно в 5 раз, по сравнению с контролем, и более плотную, упорядоченную организацию коллагеновых волокон.
Полученные данные показывают, что модель стационарного (на фильтрах) органотипического культивирования склеры в составе заднего отдела глаза, а также модель роллерного культивирования целого глаза тритона PI. waltl оказались наиболее эффективными для изучения специфического действия биорегулятора склеры. На данных экспериментальных моделях удалось выявить протекторное действие биорегулятора, которое выражалось в увеличении жизнеспособности фибробластов склеры, поддержании пространственной организации коллагеновых волокон. Кроме того, была продемонстрирована способность биорегулятора, выделенного из склеры, поддерживать адгезию между