Негативный эндогенный контроль пролиферации клеток в культуре

• Автор: Сетков, Николай Александрович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1997
• Место защиты: Красноярск
• Количество страниц: 353 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение
Глава I. Обзор литературы
1. Пролиферирующие и покоящиеся клетки. Клеточный цикл
и периоды покоя (история вопроса)
2. Состояние покоя как особое физиологическое состояние клетки
3. Уровни регуляции размножения клеток
4. Косвенные данные о наличии эндогенного механизма регуляции размножения клеток
5. Реактивация ядер покоящихся клеток. Позитивный тип эндогенного контроля размножения клеток
6. Негативный тип эндогенного контроля размножения клеток
7. Экзогенная негативная регуляции
8. Ингибиторы гемопоэтических стволовых клеток
9. Подавление пролиферации клеток в плотных культурах (ингибиторы, связанные с клеточной поверхностью)
10. Аутокринный механизм подавления пролиферации клеток
11. Гены и их продукты, экспрессирующиеся селективно в покоящихся клетках
12. Трансформированные клетки и негативный контроль пролиферации
13. Дифференцировка клеток и прекращение пролиферации
14. Потеря стареющими клетками пролиферативного потенциала и негативный контроль пролиферации
15. Гены и их продукты, обладающие антипролиферативной
и антиопухолевой активностью
16. Протеинкиназы - регуляторы клеточного цикла
17. Сх-циклины, как факторы, лимитирующие скорость прохождения клеткой С}-периода
18. Ингибиторы циклин-зависимых киназ (СБИ)
19. Другие внутриклеточные ингибиторы
20. Фосфорилирование/дефосфорилирование белков и негативный контроль пролиферации
Глава II. Материал и методы исследования
1. Характеристика объекта исследования
2. Культивирование клеток
3. Подготовка культуры клеток к опытам. Получение покоящихся и стимулированных клеток
4. Процедура слияния клеток
5. Маркирование клеток с помощью изотопов
6. Приготовление препаратов для радиоавтографического исследования
7. Идентификация слившихся клеток
8. Эксперименты с факторами роста
9. Эксперименты с ингибиторами биосинтеза белка и РНК
Ю.Эксперименты с окадаевой кислотой
П.Сбор клеток и измерение включившийся радиоактивности
12. Норсерн-блот-анализ РНК
13. Анализ клеточного цикла с помощью метода проточной
цитоф луорометрии
14. Слияние фибробластов и гепатоцитов
Глава III. Изучение характера эндогенного контроля пролиферации клеток линии N111 ЗТЗ в культуре
1. Параметры роста культуры клеток линии ШН ЗТЗ в различных условиях культивирования. Пролиферация клеток
после переноса в среду с низким содержанием сыворотки
2. Слияние покоящихся клеток с клетками, стимулированными к пролиферации: ядра стимулированных клеток в гетеродикарионах с покоящимися клетками не вступают в Б-период
3. Синтез ДНК в гетеротрикарионах
Глава VI. Углубление клеток в состояние покоя
Глава V. Изучение механизмов, контролирующих пролиферацию клеток, с помощью ингибиторов биосинтеза белка
Глава VI. Экспрессия генов раннего пролиферативного ответа (протоонкогенов) под влиянием факторов роста и ингибиторов биосинтеза белка
Глава VII. Синтез ДНК в гетеродикарионах, полученных при слиянии длительно стимулированных клеток с кратковременно стимулированными клетками
Глава VIII. Синтез ДНК в гетеродикарионах в различных
условиях культивирования клеток
Глава IX. Роль процессов дефосфорилирования в регуляции перехода клеток в состояние пролиферативного покоя и в поддержании этого состояния
1. Фосфорилирование - дефосфорилирование белков как единый биохимический принцип, лежащий в основе регуляторных механизмов
2. Протеинфосфатаза 2А (РР2А) и ее функции в клетке
3. Окадаевая кислота и ее биологические эффекты
4. Влияние окадаевой кислоты на пролиферацию клеток линии ШН ЗТЗ
Глава X. Роль протеаз и активного протеолиза в регуляции размножения эукариотических клеток
1. Влияние ингибиторов сериновых протеаз на пролиферацию клеток линии ШН ЗТЗ
2. Влияние ингибиторов лизосомных цистеиновых протеаз
на пролиферацию клеток линии ШН ЗТЗ
3. Другие лизосомотропные агенты
4. Влияние ингибиторов нелизосомных Са2+-завиеимых ней-
тральных протеаз на пролиферацию клеток линии ШН

Глава XI. Изучение эндогенного контроля в дифференцированных клетках
Белки - негативные регуляторы - возможные кандидаты
на роль эндогенного ингибитора пролиферации
Заключение
Основные результаты
Выводы
Литература

пролиферацию клеток лимфомы Буркитта (Leandersson, Lundgren, 1980) и клеток линии Daudi, полученных из лимфомы Буркитта (Gewert et al., 1983). Подавление пролиферации клеток Daudi связано с 3-10 кратным увеличением под действием INF-a синтеза и содержания гипофосфорилированной формы pRb (Kumer, Atlas, 1992). Интерфероны ß и у супрессируют рост и дифферен-цировку клеток костного мозга в культуре (Yamamoto-Yamaguchi et al., 1983), эритроидных и миелоидных предшественников (Toretsky et al., 1986), подавляют рост в клеточных линиях мелкоклеточного рака легких (Ruff et al., 1986).
Еще один мультифункциональный фактор - фактор некроза опухолей (TNF-a) - сильный ингибитор роста эндотелиальных клеток in vitro и стимулятор роста фибробластов (Stolpen et al., 1986; Frater-Schroder et al., 1987; Kahalen et al., 1988). Продемонстрировано также, что TNF-a обладает цитоста-тическим и цитотоксическим эффектами на определенные клеточные линии, полученные из опухолей мышей и человека (Old, 1985; Sugarman et al., 1985) и культивируемые эндотелиальные клетки (Sato et al., 1986). В связи с этим следует отметить, что исследования ингибиторных молекул всегда сильно усложнялись проблемой разделения цитостатических и цитотоксических эффектов.
Подобным образом ведет себя и другой цитокин - лимфотоксин (Kahalen et al., 1988). Интересно отметить, что TGF-ß, являясь ингибитором роста эндотелиальных клеток, предотвращает ингибирование, вызываемое TNF-a (Kahalen et al., 1988). Наконец обнаружено, что пролиферация некоторых высокоспециализированных клеток, таких как эстрогенчувствительные питуитарные клетки крысы линии С2 9RAP подавляется плазменным белком а-фетопротеином (Soto, Sonnenschein, 1980).
Существует обширная и довольно запутанная группа ингибиторных факторов, негативно регулирующих пролиферацию гемопоэтических клеток различной степени зрелости.
8. Ингибиторы гемопоэтических стволовых клеток
Гемопоэтическая система состоит из трех главных компартментов: 1) мультипотентных стволовых клеток, 2) клеток предшественников и 3) зрелых клеток.